如何使用牛津杯做抑菌试验/药敏实验
一、实验原理
1、将培养基平板置培养箱中培养，一方面试验菌（指示菌）开始生长繁殖；另一方面抗生素呈球面扩散，形成递减的梯度浓度，离杯越近，抗生素浓度越大，离杯越远抗生素浓度越小。
2、在牛津杯周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。
3、抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度（药敏实验）或药物对指示细菌的抑菌程度（抑菌试验）。
4、抗生素浓度越高，抑菌圈越大。
5、在抑菌圈的边缘处，琼脂培养基中所含抑菌物质的浓度即为该菌悬液中对该种指示菌的最低抑菌浓度（MIC） 。
6、抑菌圈直径与药物对测试菌的最低抑菌浓度 呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。
二、实验材料
培养基：牛肉膏蛋白胨固体培养基
菌种：大肠杆菌（E.coli)、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)
药品：阿莫西林、黄芪多糖、
其他：牛津杯、培养皿、酒精棉、酒精灯、涂布器、移液枪、1mL、200uL枪头、恒温培养箱、超净工作台、接种环
“牛津杯”可从东台市吉泰不锈钢制品厂采购，牛津杯是内径为6mm，外径为8mm，高10mm的圆筒形管子，管子的重量尽可能相等。
三、实验操作
1. 倒平板：将已灭菌的琼脂培养基加热到完全融化，倒在培养皿内，每皿约20ml，凝固。
2. 标记：菌种、牛津杯摆放位置、药物及其 浓度
3. 制备菌悬液：用生理盐水洗下试管内的菌苔并稀释。
4. 菌液涂布：吸取1mL 菌液入平板表面，用涂布器涂布将菌液涂布均匀
5. 摆放牛津杯：在培养基表面垂直摆放牛津杯，轻轻加压，使其与培养基接触无空隙。
6.加入待检药液：在杯中加入不同稀释度的药液或待检样品。
7. 孵育：加满后在37 ℃培养16~18 h。
8. 结果报告：用毫米尺量取抑菌圈直径，参考表的标准判读结果，按敏感（S）、中介（I）、耐药（R）报
以牛津杯周围没有肉眼可见生长物区域为抑菌圈，根据抑菌圈直径大小判断细菌对抗菌药的敏感性。
抑菌试验结果判定标准：抑菌圈直径（毫米）
牛津杯法的操作方法
将已灭菌的琼脂培养基加热到完全融化，倒在培养皿内，每皿15ml（下层），待其凝固。此外，将融化的PDA培养基冷却到50℃左右混入试验菌，将混有菌的培养基5 ml加到已凝固的培养基上待凝固（上层）。以无菌操作在培养基表面直接垂直放上牛津杯（内径6mm、外径8mm、高10 mm的圆形小管，管的两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），轻轻加压，使其与培养基接触无空隙，在杯中加入待检样品（发酵液），牛津杯一般可以装240微升,勿使其外溢。加满后置37℃培养16-18小时，观察结果，抑菌圈用尺直接量就可以。在培养中,一方面试验菌开始生长，另一方面抗生素呈球面扩散，离杯越近，抗生素浓度越大，离杯越远抗生素浓度越小。随着抗生素浓度减小，有一条最低抑菌浓度带，在带范围内，菌不能生长，而呈透明的圆圈，这就叫“抑菌圈”。抗生素浓度越高，抑菌圈越大。
用牛津杯做抑菌实验为什么要用双层琼脂平板法
用双层琼脂平板的话，底层琼脂层可以提供一个尽量水平的底部，减少因为培养皿底部不均匀造成的误差，当然摆放的时候要在尽量水平的操作平台上面使其凝固。
抑菌圈实验，牛津杯法，为什么在添加剂低浓度没有圈，加到80g/l才出圈！ 求在低浓度出圈办法！都试了4种 15分
抑菌效果会与浓度有关系的，如果同样的方法高浓度有抑菌圈而低浓度木有，则可能说明低浓度时抑菌效果不明显或木有抑菌效果
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