有什么好的方法进行蛋白表达？
免疫荧光法 抗体抗原杂交法 免疫组化监测
哪些实验方法可检测细胞中某种蛋白表达量？
蛋白质分子中关键活性部位氨基酸残基的改变，会影响其生理功能，甚至造成分子病（molecular disease）。例如镰状细胞贫血，就是由于血红蛋白分子中两个β亚基第6位正常的谷氨酸变异成了缬氨酸，从酸性氨基酸换成了中性支链氨基酸，降低了血红蛋白在红细胞中的溶解度，使它在红细胞中随血流至氧分压低的外周毛细血管时，容易凝聚并沉淀析出，从而造成红细胞破裂溶血和运氧功能的低下。另实验证明，若切除了促肾上腺皮质激素或胰岛素A链N端的部分氨基酸，它们的生物活性也会降低或丧失，可见关键部分氨基酸残基对蛋白质和多肽功能的重要作用。
所谓“分子病”，首先是蛋白质一级结构的改变，从而引起其功能的异常或丧失所造成的疾病。可见蛋白质关键部位甚至仅一个氨基酸残基的异常，对蛋白质理化性质和生理功能均会有明显的影响。分子病是基因突变引起的遗传性疾病，当然首先就是DNA分子结构的改变，是其分子编码相应蛋白质基因结构的改变，这是 1949年美国科学家Pauling在研究血红蛋白时首先提出来的。目前已知血红蛋白分子异常有500多种，其中约一半在临床上可造成分子病。分子病也包括整条多肽链在合成时的缺失，如血红蛋白分子病中的地中海贫血，可缺失血红蛋白α－亚基或β－亚基等。现在已知人类有几千种先天遗传性疾病，其中大多是由于相应蛋白质分子异常或缺失所致。
检测基因蛋白水平的表达有哪些方法
怎样用基因水平或蛋白水平检测细胞膜上表达的物质
A、不同种类的蛋白质行使不同的功能，细胞中蛋白质的种类越多，通常细胞的功能越复杂，A错误．B、细胞膜上有运载物质的载体蛋白、细胞质中有起催化作用的酶、细胞核中的染色体上有与DNA结合的有蛋白质，不同种类的蛋白质功能不同，是生命活动的主要承担者，B正确．C、DNA主要存在于细胞核中，RNA主要存在于细胞质中，C错误．D、人细胞核及细胞质中的遗传物质都是DNA，只有少数病毒体内只含RNA的遗传物质才是RNA，D错误．故选：B．
检测基因表达的方法
检测基因表达的方法：
转录水平检测：RT-PCR，real-time PCR，northern blot
翻译水平检测：western blot
还有直接检测，如报告基因、融合荧光蛋白等。
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RT-PCR是反转录PCR，是半定量方式。real-time PCR可以精确定量。 二者不同。后者为了区别于RT-PCR，一般不缩写。
如何检测蛋白表达量的升高或降低
植物油体表达体系的研究进展
刘昱辉、贾士荣**
中国农业科学院生物技术研究所,北京100081
摘要：介绍了植物种子中油体和油体蛋白（oleosin）的结构特征及其编码基因的调控,阐述了用植物油体表达体系这一新型植物生物反应器生产目的蛋白的研究进展和前景.
关键词：油体；油体蛋白；表达体系；植物生物反应器；目的蛋白
现有外源基因表达系统主要包括：细菌、丝状真菌、酵母、哺乳动物细胞、动物乳腺、昆虫（昆虫细胞、昆虫杆状病毒和昆虫整体）和植物表达系统（植物整体、病毒载体和油体）等.这些外源基因表达系统在表达量、表达产物的分离纯化及活性、成本等方面各有优缺点.从近年的研究进展看,利用植物表达系统大规模生产各种目的蛋白还受到诸多因素的限制,表达量低、提取和纯化成本高是主要的限制因素.植物油体表达体系将目的蛋白的编码基因插入油体蛋白（oleosin）编码基因的3`端,以oleosin启动子驱动目的蛋白与oleosin一起在转基因植物的油体中特异表达,获得转基因植物种子后,将种子粉碎, 利用油体的疏水性,离心将油相和水相分开,回收上层油体部分,即可去除种子中大部分的非目标成分,从而显著降低目的蛋白的分离纯化成本,因此近年来倍受关注.作为一种新型的植物生物反应器,为最终利用转基因植物生产外源蛋白提供了新的途径.
1 油体（oil body）
植物种子中贮存的营养物质主要包括蛋白质、脂肪和碳水化合物.其中脂类物质一般以三酰甘油（triacylglycerols,tag）的形式存在,荷荷芭（jojoba）例外,它贮存蜡酯（wax esters）.种子中的tag分子之间不是彼此聚合的,而是分散成许多小的稳定的亚细胞微滴,被称为油体.油体作为生物体中最小的细胞器有其自身的结构和特征.
1.1 油体大小
油体为直径0.5-2.5μm的球体,其大小因植物种类的不同而不同,且受营养和环境的影响.即使同一粒种子,不同组织中的油体大小也不相同.从生物学角度讲,油体的大小主要决定于两个因素：（1）种子发芽时为脂酶催化tag提供最大的作用表面；（2）消耗最少量的油体蛋白和磷脂（phospholipids, pl）.如果油体的直径小于0.2μm,虽可为脂酶的催化提供更大的作用表面,但却需耗费大量pl和oleosin.相反,如果油体直径大于2.5μm,虽节省了pl和oleosin的用量,但由于作用表面过小,在种子发芽及幼苗生长时,脂酶不以迅速水解脂类为植物提供生长所需的能量.
1.2 油体成分
油体的成分包括：（1）92%-98%的中性脂类：主要为tag,约占95%,少量的二酰甘油（dag）和自由脂肪酸；（2）1%-4%的磷脂（pl）：主要为磷脂酰胆碱,约占60%-70%,少量的为磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇；（3）1%-4%油体蛋白：其中90%为oleosin,少量的为caleosin、细胞色素c还原酶等.某些植物（如蓖麻和大豆）成熟种子的油体膜上还有脂酶和酰基脂酶存在.花粉粒油体中未检测到oleosin,橄榄和鳄梨果实中皮层油体中也没有oleosin.由于这些油体中的脂类物质不是用于长期贮存,因此murphy和vance提出oleosin可能仅为储藏器官油体所特有,但næsted等发现根尖油体中有oleosin存在.
1.3 油体的基本结构
根据tzen等提出的油体结构模型,油体内部为液态tag,外部是由单层磷脂分子及其镶嵌蛋白-oleosin组成的半单位膜,这个半单位膜的基本单位是由13个pl分子和1个oleosin分子组成（图1）.p......余下全文>>
如何检测一个细胞中的蛋白质表达量
实时荧光定量PCR检测mRNA的表达,然后westernblot检测蛋白表达量.
首先你确定拿到了这两种细胞系，通过PCR反应证明一个是野生型一个是突变型，即snp。然后用试剂盒提取RNA，设计引物，采用半定量或绝对定量的方法，测定mRNA表达水平；然后另取细胞裂解，提取总蛋白，用特异性抗体检测蛋白表达量。
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