细胞增殖的研究方法
细胞增殖的研究方法有很多,主要包括:BrdU,EdU,CCK8等方法。其中EdU检测方法是最新的细胞增殖检测方法。EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物,能够在细胞增殖时期代替T渗入正在复制的DNA分子,通过基于EdU与Apollo®荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性,通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况。与BrdU检测方法相比,EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500,在细胞内很容易扩散,无需DNA变性(酸解、热解、酶解等)即可有效检测,可有效避免样品损伤,在细胞和组织水平能更准确地反映细胞增殖等现象。
如何检测组织中细胞增殖的检测
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BrdU检测细胞增殖的方法
细胞增殖的检验方法:BrdU标记法
1、细胞以1.5×105 /ml细胞数接种于直径35ml培养皿中(内放置一盖玻片),培养1天,用含0.4%FCS培养液同步化3天,使绝大多数细胞处于G0 期。
2、终止细胞培养前,加入BrdU(终浓度为30μg/L),37℃,孵育40min。
3、弃培养液,玻片用PBS洗涤3次。
4、甲醇/醋酸固定10min。
5、经固定的玻片空气干燥,0.3%H2 O2 -甲醇30min灭活内源性氧化酶。
6、5%正常兔血清封闭。
7、甲酰胺100℃,5min变性核酸。
8、冰浴冷却后PBS洗涤,加1抗即抗小鼠BrdU单抗(工作浓度1:50),阴性对照加PBS或血清。
9、按ABC法进行检测,苏木素或伊红衬染,在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数,计算标记指数(LI)。
如何用流式检测细胞增殖情况
一般可以用tracing dye. 也就是一些荧光染料,被细胞摄取后不会被排出。这样,先用染料染色。经过数个细胞周期后,上机检测。如果细胞没有分裂增殖,那细胞的荧光强度最高。每分裂增殖一次,荧光强度衰减一半(分到两个子细胞了)。以此类推。
增殖越多的细胞,会出现几个逐渐减半荧光强度的峰值。峰值和荧光强度减弱的越多,就说明增殖的越多。
求助对于T细胞增殖的检测方法
懂爱的女人”那默默无悔给予他极大支持和鼓励的原因,我想,那就是爱情了.
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