一:荧光偏振分析法中横坐标 nm 什么意思
荧光偏振免疫分析常用于测定半抗原的药物浓度。反应系统内除待测药物外,同时加入一定量用荧光素标记的相应药物(小分子),使二者与有限量的特异性抗体(大分子)竞争结合。当待测药物浓度高时,经过竞争反应,大部分抗体被其结合
二:荧光偏振免疫分析法哪里有详细的介绍?
荧光偏振免疫分析常用于测定半抗原的药物浓度。反应系统内除待测药物外,同时加入一定量用荧光素标记的相应药物(小分子),使二者与有限量的特异性抗体(大分子)竞争结合。当待测药物浓度高时,经过竞争反应,大部分抗体被其结合,而荧光素标记的药物多呈游离的小分子状态。由于其分子小,在液相中转动速度较快,测量到的荧光偏振程度也较低。反之,如果药物浓度低时,大部分荧光素标记药物与抗体结合,形成大分子的抗原抗体复合物,此时检测到的荧光偏振程度也较高。根据荧光偏振程度与药物浓度呈反比关系,我们可以建立座标系。通过检测反应系中偏振光的大小,从坐标曲线上就可以精确地得知样品中待测药物的相应含量。PVDF膜 www.bio1000.com/...5.html 生物帮有这方面的介绍。
三:荧光偏振的应用有哪些?
这是一项相对较为成熟的技术。它利用荧光偏振原理,采用竞争结合法机制,常用来监测小分子物质如药物、激素在样本中的含量。以药物检测为例,以荧光素标记的药物和含待测药物的样本为抗原,与一定量的抗体进行竞争性结合。荧光标记的药物在环境中旋转时,偏振荧光的强度与其受激发时分子转动的速度成反比。大分子物质旋转慢,发出的偏振荧光强;小分子物质旋转快,其偏振荧光弱(去偏振现象)。因此,在竞争性结合过程中,样本中待测药物越多,与抗体结合的标志抗原就越少,抗原抗体复合物体积越大,旋转速率越慢,从而激发的荧光偏振光度也就越少。当我们知道了已知浓度的标记抗原与荧光偏振光性的关系后就可以测量未知浓度的物质。因此,这项技术可用来检测环境或食品样品中有毒物质如农药的残留量。
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详细资料请参考:on
product.bio1000.com/100150/
四:荧光淬灭对荧光偏振有增强作用吗
RNA探针.TaqMan 荧光探针种寡核苷酸探针,荧光基团连接探针5’末端,淬灭剂则3’末端.PCR扩增加入引物同加入特异性荧光探针,探针完整,报告基团发射荧光信号淬灭基团吸收;PCR扩增,Taq酶5'-3'外切酶性探针酶切降解,使报告荧光基团淬灭荧光基团离,荧光监测系统接收荧光信号,即每扩增条DNA链,荧光形,实现荧光信号累积与PCR产物形完全同步.用荧光基团FAM,TET,VIC,HEX. 新型TaqMan-MGB探针使该技术既进行基定量析,析基突变(SNP),望基诊断体化用药析首选技术平台.
五:荧光目测 优缺点
[编辑本段]概述
某些物质受一定波长的光激发后,在极短时间内(10-8秒)会发射出波长大于激发波长的光,这种光称为荧光。这一发光现象在各方面的应用及有关的方法称为荧光技术(fluorescent technique)。
[编辑本段]发光机制
光照射物质时,光子打到分子上,大约在10-15秒内被吸收,原来处于基态的电子被激发到较高的能级,从而使分子处在激发态。此后,激发态分子通过内转换过程把部分能量转移给周围分子,使较高激发态的电子很快回到最低激发态的最低振动能级(亦称第一单线态)。处在第一单线态的分子的平均寿命是10^-8秒左右。如果这种分子通过发射出相应的光子而回到基态的各个不同的振动能级,即可产生荧光,根据回到的振动能级的不同,荧光的波长就不同,从而形成荧光发射带光谱。由于发射荧光前已有一部分能量被消耗,所以发射荧光所相应的能量要比物质吸收的光能量小,故而荧光的发射特征波长总比激发特征波长长。
物质能否产生荧光,主要和物质本身的结构及周围介质环境(如溶剂极性、pH值、温度等)有关。
[编辑本段]有关概念和参数
1、激发光谱:固定发射波长,用不同波长的激发光激发样品,记录下相应的荧光发射强度,即得激发光谱。
荧光强度公式1
2、发射光谱:固定激发波长,记录在不同波长所发射的荧光的相对强度,即得发射光谱。
3、荧光强度:荧光的相对强弱,与很多因素有关,可用(1)式表示:荧光强度公式2
式中F表示荧光强度,K是仪器常数,Φ为荧光量子产率,I0是激发光强度;ε是样品的克分子消光系数;b为样品池的光径长度;c为样品浓度。当浓度很稀时(1)式可近似为(2)式:
从此式可知,在低浓度等件下,样品浓度和荧光强度呈线性关系。量子产率公式
4、量子产率:量子产率一般用Φ表示,其定义如(3)式所示:
5、荧光寿命:用τ表示荧光寿命,并以(4)式定义之:
F(t)=F0e-t/τ (4)
该式表达了荧光物质被一瞬时光脉冲激发产生的荧光随时间的衰减。荧光寿命τ就是荧光强度下降到最大荧光强度F0的1/e时所需要的时间。
荧光偏振公式
6、荧光偏振:荧光偏振常用偏振度表示,其定义如(5)式:
式中F‖表示激发光起偏器和荧光检偏器的透射轴方向平行时测得的荧光强度;F⊥是上述两方向互相垂直时的荧光强度。当 P=0时,说明完全不偏振;P在-1至+1之间即为部分偏振。
[编辑本段]应用
荧光技术在生物化学及分子生物学研究中应用主要包括以下几个方面:
1、物质的定性:不同的荧光物质有不同的激发光谱和发射光谱,因此可用荧光进行物质的鉴别。与吸收光谱法相比,荧光法具有更高的选择性。
2、定量测定:利用在较低浓度下荧光强度与样品浓度成正比这一关系可以定量分析样品中荧光组分的含量,常用于测定氨基酸、蛋白质、核酸的含量。荧光定量测定的一个优点是灵敏度高,例如维生素B2的测定限量可达1毫微克/毫升,这一优点使测定时所需要样品量大大减少。
这种定量测定方法还可应用于酶催化的反应,只要反应前后有荧光强度的变化,就可用来测定酶的含量及酶反应的速率等。
3、研究生物大分子的物理化学特性及其分子的结构和构象:荧光的激发光谱、发射光谱、量子产率和荧光寿命等参数不仅和分子内荧光发色基团的本身结构有关,而且还强烈地依赖于发色团周围的环境,即对周围环境十分敏感。利用此特点可通过测定上述有关荧光参数的变化来研究荧光发色团所在部位的微环境的特征及其变化。在此研究中,除了利用生物大分子本身具有的荧光发色团(如色氨酸、酪氨酸、鸟苷酸等......余下全文>>
六:双荧光标记的适配体荧光偏振值会下降吗
双标记荧光探针法是使用5’端带有荧光物质(如:FAM等),3’端带有淬灭物质(如:TAMRA等)的双标记荧光探针进行荧光检测的方法。当探针完整时,5’端的荧光物质受到3’端的淬灭物质的制约,不能发出荧光。而当双标记荧光探针被分解后
七:如何用荧光偏振法测定线粒体膜流动性
你必须清楚的是,材料所关注、涉及的内容无非就(我们前面有所涉及,记得吗?):
1,问题的表现形式;
2,问题产生的原因及所带来的影响(涵盖正面影响和反面影响);
3,解决问题的措施和办法。
所以,在实际的练习、考试过程中,按照这种方法就能合理、顺畅的梳理出材料的核心内容,且命题无非就围绕这几个方面来展开,要么是某一个方面,要么是某几个方面。