转染的目的

一:转染目的基因进入靶细胞,目的基因的表达由什么启动

看你前面用的是很么启动子,如果是持续表达的启动子,目的基因进入靶细胞后会自动表达。如果是诱导表达的,可能根据启动子的不同,有的是IPTG诱导表达,有的是铜离子诱导表达,有的是温度改变,temperature shift以后会表达

二:基因敲除和 转染 是一个意思吗

这两个概念不仅不同,甚至有些相反。

基因敲除是指将某个基因从基因组中去掉。基因转染是指将某个基因转入细胞的过程,功用的技术有电转、磷酸钙转染、脂质体转染和病毒载体介导的转染。

从技术上讲,基因敲除是一套复杂的过程,需要用到许多生物技术,耗时长,通常要数月时间。转染就简单很多,只需要一到数天时间。

三:转染过程中载体蛋白对于目的蛋白是否有影响

转染后Western检测不到高表达量的目的蛋白有很多原因

首先就是抗体是否合适需检测的目的蛋白,可以考虑更换其他抗体

然后转染可以是瞬时转染,也可以是稳定细胞株转染

假如是瞬时转染检测不到,可能就是抗体或者Western操作的问题

假如是稳定细胞株转染检测不到,可能是目的基因没有稳定整合到基因组中,或者插入的位置不对,需要重新筛选细胞株

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