一:酶活力测定的注意事项有哪些
测定酶活力时,必须注意以下几点:
(1)酶促反应过程中,只有最初一段时间内反应速度与酶浓度成正比,随着反应时间的延长,反应速度即逐渐降低。
(2)要规定一定的反应条件,如时间、温度、pH等,并在酶测定过程中保持这些反应条件的恒定,如温度不得超过规定温度的士1℃,pH应恒定。
(3)配制的底物浓度应准确且足够大,底物液中应加入不抑制该酶活力的防腐剂并保存于冰箱中,以防止底物被分解。
(4)标本要新鲜,由于绝大多数酶可因久置而活力降低,标本如无法及时测定,应保存于冰箱中。用血浆时,应考虑到抗凝剂对酶反应的影响。有些酶在血细胞、血小板中的浓度比血清高,为此在采血、分离血清时,应注意防止溶血和白细胞的破裂。
(5)在测定过程中,所用仪器应绝对清洁,不应含有酶的抑制物,如酸、碱、蛋白沉淀剂等。
二:酶活力的测定方法有哪些
酶活力的测定方法:有两种主要方法即终止反应法和连续反应法。
终止反应法:是在恒温反应系统中,每隔一定时间,取出一定体积的反应液,用强酸强碱或SDS以及加热等使反应立即停止,然后用化学法放射性化学法或酶偶联法分析产物的形成量或底物的消耗量。这是最经典的酶活力测定方法,几乎所有的酶都可以根据这一原理设计出具体的测定方法。
连续反应法:无须终止反应,而是在酶反应过程中用光化学仪器或电化学仪器等来监测反应的进行情况,对记录结果进行分析,然后计算出酶活力。
三:测定酶活力的思路是什么,本实验的关键步骤有哪些
酶力测定:两种主要即终止反应连续反应
终止反应:恒温反应系统每隔定间取定体积反应液用强酸强碱或SDS及加热等使反应立即停止用化放射性化或酶偶联析产物形量或底物消耗量经典酶力测定几乎所酶都根据原理设计具体测定
连续反应:须终止反应酶反应程用光化仪器或电化仪器等监测反应进行情况记录结进行析计算酶力
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四:测定酶活力的思路是什么,本实验的关键步骤有哪些
淀粉力酶测定脂肪力酶测定胶力酶测定蔗糖力酶测定乳酸力酶测定胰蛋白力酶测定等等应该据我解些/
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五:还原酶活性测定方法
实验方法
预先将丙酮酸钠溶液及NADH溶液放在25℃水浴中预热。
取2支石英比色杯,在2支比色杯中加入0.1mol/L pH7.5磷酸氢二钾-磷酸二氢钾缓冲液3ml,置于紫外分光光度计中,在340nm处将光吸收调节至零;另一支比色杯用于测定LDH活力依次加入丙酮酸钠溶液2.9ml、NADH溶液0.1ml,加盖摇匀后,测定340nm光吸收比值。
取出比色杯,加入稀释后的酶溶液10μl,立即即时,摇匀后,每隔0.5分钟测A340,连续测定3分钟。
以A对时间作图,取反应最初线性部分,计算没分钟A340减少值。
注意事项
实验材料应尽量新鲜,如取材后不立即用,则应储存在-20℃冰箱。
酶液的稀释度及加入量应控制每分钟A340下降值在0.1~0.2之间,以减少实验误差。
NADH溶液应在临用前配制。
六:脂肪酶活力的测定实验步骤?
答:可以考虑采用 橄 榄 油乳化液法测定脂肪酶的活力,具体步骤如下:取100 ml,三角瓶4个,每瓶加人5 mL磷酸缓冲液(pH= 7.5 , 0.02 5mol/1)和4m l,聚乙烯醇橄榄油乳化液,置于37 C水浴中保温5 min,然后在两个瓶中各加人1 MI.酶液,从加人酶液开始精确计算时间,继续保温10 min,取出后立即加入95%乙醇5 ml,,以停止酶作用,再加酚酞指示剂3滴,用0.0 5m ol/I,的氢氧化钠滴定至溶液呈粉红色为止,另外两个锥形瓶不加酶液,也继续保温15 min后,立即取出,各加人15 MI 95%乙醇作为对照,取平均值计算酶的活性或相对活性..酶活力定义为在37 C pH=7.5条件下,每分钟催化生成1 pmol脂肪酸所需的酶量鼎一个活力单位(U)。 还需要确定具体脂肪酶的性质,是酸性还是碱性,最适作用pH 以及温度,通过实验来确定,从而调整测定时磷酸缓冲液pH值,温度等具体条件。 以上信息仅供参考,希望能向你提供帮助,祝你学习愉快。