一：谁能告诉我，怎样用对-硝基苯磷酸盐（即PNPP）法测定碱性磷酸酶（ALP）活性？ 20分
【步骤】
（1）用吸管吸掉96孔板内的培养液，用PBS冲洗3遍，加入含25mmol/L二乙醇胺，1mmol/L氯化镁和6.7mmol/L PNPP的反应液。
（2）每孔150ul.37℃避光放置半小时,然后加0.1mol/L氢氧化钠100ul终止反应,用酶标仪于405nm波长下测定OD值.
（3）样品OD值在ALP标准曲线上读取酶活性值(U/L).
ALP标准曲线绘制:
取PNP0.0111克用三蒸水溶解后稀释至250ml,此时PNP的浓度为320umol/L.依次稀释到160 umol/L，80umol/L,40umol/L,20umol/L,10umol/L和5mol/L.相当于ALP1280 U/L,640U/L,320U/L,160U/L,80U/L,40U/L和20U/L(活性值).用酶标仪于405nm波长下测定PNP的OD值.以ALP活性值作为自变量,对应的OD值作为应变量,求得直线回归方程.
【结果】测定碱性磷酸酶的含量
还有其他方法来测定畅比如
以ALP为目标物的检测方法有
1 Gomori钙钴法
2偶氮偶联法
3碱性磷酸酶染色试剂盒法。
4.PNPP偶氮法
5. BCIP/NBT比色法
6 茜素红法
7. von Kossa法
二：碱性磷酸酶比活性是什么意思 5分
碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中，其中以肝脏为最多其次为肾脏，骨骼、肠、和胎盘等组织,。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。但它不是单一的酶，而是一组同功酶。目前已发现有 AKP1 、AKP2 、AKP3 、AKP4 、AKP5 与 AKP6 六种同功酶。其中第 1 、 2 、 6 种均来自肝脏，第 3 种来自骨细胞，第 4 种产生于胎盘及癌细胞，而第 5 种则来自小肠绒毛上皮与成纤维细胞。 血清中的ALP主要来自肝脏和骨骼。生长期儿童血清内的大多数来自成骨细胞和生长中的骨软骨细胞，少量来自肝。 比活性（specific activity）:是指每毫克蛋白中所含干扰素的活性单位.
比活性是单位重量（mg）蛋白样品中所含酶的活性单位，随着酶的逐步纯化其比活性逐步升高，可借以鉴定酶的纯化程度和纯化步骤的正确性
三：测定碱性磷酸酶的活性,所用缓冲液的ph为多少?
10
四：肝功能检查碱性磷酸酶偏高
1.生理性增高
在生理性的骨骼发育期，碱性磷酸酶活力可比正常人高1～2倍。处于生长期的青少年，以及进食脂肪含量高的食物后均可以升高。
2.病理性升高
（1）骨骼疾病如佝偻病、软骨病、骨恶性肿瘤、恶性肿瘤骨转移等；
（2）肝胆疾病如肝外胆道阻塞、肝癌、肝硬化、毛细胆管性肝炎等；
（3）其他疾病如甲状旁腺机能亢进。
补充，看了补充检查单，其实很正常，碱性磷酸酶稍稍偏高，不是疾病。
五：急求正常人碱性磷酸酶活性值
ALP正常值为成人是3到15金氏单位…儿童是5到28金氏单位…貌似是这个范围…
六：体检结果碱性磷酸酶偏高是怎么回事
碱性磷酸酶的正常值：
碱性磷酸酶的参考正常值会根据测试方法或人群的不同会有所区别，正常值范围的不同也与各医院使用的方法和仪器有关。一般情况下碱性磷酸酶正常参考值为：女性50~135U/L、男性45~125U/L。
超出这个范围就可以认为是偏高了。发育期的儿童、孕妇、以及处于骨折愈合期这三类人群，碱性磷酸酶高是较常见的。
二、碱性磷酸酶偏高是怎么回事
生理性因素
1、儿童在生理性的骨骼发育期，碱性磷酸酶活力可比正常人高1~2倍，骨质疏松症时碱性磷酸酶正常。
2、处于生长期的青少年，以及孕妇和进食脂肪含量高的食物后、剧烈运动后血清碱性磷酸酶水平均可以升高。
3、妊娠可导致血清碱性磷酸酶水平升高，妊娠九个月血清碱性磷酸酶水平可达正常水平的2~3倍。
病理性因素
1、各种肝胆疾病均可使血清碱性磷酸酶水平升高，肝外胆道阻塞时血清碱性磷酸酶水平可达参考值上限3倍以上，并且阻塞愈完全碱性磷酸酶水平愈高。肝内胆道阻塞时血清碱性磷酸酶水平上升幅度较小。
2、原发性和继发性肝癌时碱性磷酸酶亦明显升高，与癌组织中或癌肿周围肝细胞合成碱性磷酸酶增加有关。
3、其他肿瘤如乳腺癌、肺癌、卵巢癌、骨细胞瘤、骨肉瘤等，碱性磷酸酶增高时，提示可能有肝脏转移。
4、变形性骨炎患者血清碱性磷酸酶水平最高，常达参考值上限10~25倍；成骨细胞癌患者碱性磷酸酶也很高；骨软化症时，碱性磷酸酶水平中度升高；佝偻病患者血清碱性磷酸酶水平可以升至参考值上限2~4倍。这两种疾病经维生素D治疗后，碱性磷酸酶水平逐渐下降。骨折愈合期可有暂时性碱性磷酸酶水平上升。
3、碱性磷酸酶活性升高还可见于甲状腺及甲状旁腺功能亢进、肾小管性酸中毒、遗传性磷酸酶过多症等疾病。
6、很多药物可使碱性磷酸酶增高，如巴比妥类、抗生素。
三、碱性磷酸酶偏高怎么办
首先要明确碱性磷酸酶高的缘由，由于碱性磷酸酶偏高的缘由有诸多种，建议去正规医院做B超等相关检查，查明病因及时治疗。
碱性磷酸酶增高提示有骨骼疾病如佝偻病、软骨病、骨恶性肿瘤、恶性肿瘤骨转移等；肝胆疾病如肝外胆道阻塞、肝癌、肝硬化、毛细胆管性肝炎等；其他疾病如甲状旁腺机能亢进。需要根据不同的疾病，采取不同的方法。
七：中性粒细胞碱性磷酸酶的意义
（1）急性化脓性感染时NAP活性明显升高，病毒性感染时其活性在正常范围或略低。因此，NAP可用于细菌和病毒感染的鉴别；（2）慢性粒细胞白血病的NAP活性明显降低，积分值常为0。类白血病反应的NAP活性极度增高，故可作为与慢性粒细胞白血病鉴别的重要指标。（3）急性粒细胞白血病时NAP积分值减低；急性淋巴细胞白血病的NAP多增高；急性单核细胞白血病时一般正常或减低。故可作为急性白血病的鉴别方法之一。（4）再生障碍性贫血时NAP活性增高；阵发性睡眠性血红蛋白尿时活性减低，可作为两者的鉴别。（5）其他情况：如应用肾上腺皮质激素时NAP升高；恶性组织细胞病时NAP活性降低。
八：碱性磷酸酶在人体中起什么作用，过多有什么影响？ 30分
碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中，其中以肝脏为最多其次为肾脏，骨骼、肠、和胎盘等组织，。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。但它不是单一的酶，而是一组同功酶。目前已发现有 AKP1 、AKP2 、AKP3 、AKP4 、AKP5 与 AKP6 六种同功酶。其中第 1 、 2 、 6 种均来自肝脏，第 3 种来自骨细胞，第 4 种产生于胎盘及癌细胞，而第 5 种则来自小肠绒毛上皮与成纤维细胞。 血清中的ALP主要来自肝脏和骨骼。生长期儿童血清内的大多数来自成骨细胞和生长中的骨软骨细胞，少量来自肝。
化学特征
碱性磷酸酶名字
alkaline phosphatase (ALP 或 AKP)
细菌ALP二级结构
现多用ALP
系统名phosphate-monoester phosphohydrolase (alkaline optimum)
其他名称还有alkaline phosphomonoesterase; phosphomonoesterase; glycerophosphatase; alkaline phosphohydrolase; alkaline phenyl phosphatase; orthophosphoric-monoester phosphohydrolase (alkaline optimum);basic phosphatase
CAS 号: 9001-78-9
碱性磷酸酶(AKP或ALP)
属于同源二聚体蛋白，分子量为56KDa。每个单体由449个氨基酸组成，完整的AKP分子呈现典型的α/β的拓扑结构，同时每个单体均具有一个活性中心，活性中心区域由Asp101-Ser102-Ala103三连体、Arg166、水分子、三个金属离子及其配体氨基酸组成。AKP被phoA 基因编码，与很多分泌蛋白一样，在细胞质内合成氨基末端带有信号肽的单体前体，信号肽引导前体跨内膜运输后被切除，同源二聚体形成。
碱性磷酸酶是一种能够将对应底物去磷酸化的酶，即通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去，并生成磷酸根离子和自由的羟基，这类底物包括核酸、蛋白、生物碱等。而该脱去磷酸基团的过程被称为去磷酸化或脱磷酸化。碱性磷酸酶是磷酸酶的一种，磷酸酶的作用与激酶的作用正相反，激酶是磷酸化酶，可以利用能量分子，如ATP，将磷酸基团加到对应底物分子上。碱性磷酸酶在碱性环境有最大活力，对来源于细菌中的ALP来说，其最适pH是8.0，而对来源于牛的ALP则是8.5。
ALP是一种含锌的糖蛋白，在碱性环境中（最适Ph为10左右）可以水解各种天然及人工合成的磷酸单酯化合物底物。
碱性磷酸酶偏高的原因
当肝脏受到损伤或者障碍时经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于肝内胆道胆汁排泄障碍，反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。[1]
碱性磷酸酶偏高的原因可以分为生理性原因和病理性原因，具体讨论如下：
1、生理性原因 儿童骨骼发育期、孕妇、骨折愈合期，这些情况下骨组织中的碱性磷酸酶很活跃，所以检测时值会偏高。
2、病理性原因 当人体患有阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等时，肝细胞过度制造ALP，经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于胆汁排泄障碍，反流入血，引起血清中的碱性磷酸酶偏高。
3、骨骼有病时，例如佝偻病、骨上肿瘤、软骨病等。
4、其他不是很常见的疾病，例如肾病、严重性贫血、甲状腺机能不全、白血病等[2......余下全文>>
九：碱性磷酸酶(ALP或AKP)的介绍
碱性磷酸酶是成骨细胞的一种外酶，它的表达活性是成骨细胞分化的一个明显特征。碱性磷酸酶在机体中的 主要生理功能是在成骨过程中水解磷酸酯，为羟基磷灰石的沉积提供必要的磷酸，同时水解焦磷酸盐，解除其对骨盐形成的抑制作用，有利于成骨作用。
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