质粒提取试剂盒步骤

一：质粒抽提的操作过程

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二：一般试剂盒提取质粒浓度大概是多少

不同种类的试剂盒提取的浓度都不同。一般产品包装盒中都附有说明书的。

三：质粒如何提取

需要掌握技能

1.质粒转化

具体操作步骤：

将1ul 质粒DNA加入1.5ml的离心管；

将感受态细菌（competent cells）从－70℃冰柜中取出，快速吸取50ul感受态细菌，加入含质粒DNA的1.5ml的离心管；

轻轻地旋转以混匀内容物，在冰中放置30～60 min；

42度热休克90s（该时间应该非常准确，用Timer记时），冰上放置5min；

每管加500ul LB培养液，放37℃水浴1h；

吸取200ul培养物至含相应抗生素的90mm LB平板上，涂布棒将培养液涂布均匀；

倒置平皿，于37℃培养，12～16h后可出现菌落。

2.质粒的抽提

具体操作步骤：

用前将RNase A管的液体全部加到 SolutionⅠ（加好RNaseA的溶液I一般储存在4℃）；

将60ml的乙醇加到洗涤缓冲液瓶

37℃培养16h的平板中挑取一个单菌落（直径2～3mm），接种到10ml LB培养液 37℃剧烈振摇培养16 h；

取4ml菌液到5ml 离心管，8000rpm室温离心3min；

 去上清，放于面巾纸上吸干痕液，

加250 ul Solution Ⅰ（注意用前应该加RNase A管），于涡旋振荡器重悬细胞；

加250 ul 37℃预热2-3min的Solution Ⅱ；

加350 ul Solution Ⅲ，将5ml离心管置于拇指和食指间柔和地反复颠倒数次；

将5ml离心管中的溶液倒入1.5ml 离心管中，

室温孵育2-3min，12000rpm 4℃离心15 min；

装配2ml 收集管（白色）和柱状收集管（蓝色）

将上清倒入柱状收集管（蓝色）中；

8000rpm室温离心3min；

去掉收集管中的液体，加500ul Buffer HB 到柱状收集管中，10000rpm室温离心1min；

去掉柱状收集管中的液体，加750ul Wash Buffer（注意用前加乙醇），10000rpm室温离心1min；

重复上述步骤一次；

不加Wash Buffer将管子10000rpm室温离心1min；

将柱状管放到一个消过毒的1.5ml 离心管中，加65ul灭菌水，室温放置2min，8000rpm室温离心3min 洗提（洗脱）DNA。

3.质粒电泳

具体操作步骤（以倒20ml的胶为例）：

用50ml量筒量取20ml 1XTAE；

用电子天平称量0.16g琼脂糖，并倒入20ml电泳缓冲液中；

将称量纸覆盖在装有琼脂糖的电泳缓冲液的三角瓶中，放入微波炉中转1min30s，至肉眼看不到颗粒状琼脂为止；

至室温待溶液冷却至60度左右，将三角瓶中溶液倒入制胶盒中，并加入上样梳子；

至室温约30min胶凝固后，拔掉梳子并将凝胶安放到电泳槽内；

向电泳槽加入电泳缓冲液，刚好没过凝胶约1mm；

将样品中加入适量的10X上样缓冲液，该上样缓冲液的体积计算如下：如果样品体积是20ul加入......余下全文>>

四：大家质粒转染细胞用什么质粒提取试剂盒

内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁(cellwall)上的特有成分，主要是脂多糖中的类脂A，在细菌被裂解时被释放出来，由于其化学结构和特性，在质粒的纯化过程中很容易混入质粒DNA一同提取出来。内毒素的存在会严重的影响质粒转染细胞的效率，此外会激活造血细胞（如B细胞、巨噬细胞等）的非特异免疫反应，造成实验的假阳性，所以转染级质粒的提取纯化必须去除内毒素。

五：质粒提取试剂盒哪个公司的好

看 你要贵的还是便宜的

最好的是 promega的。其他的说实在都差不多。如果对质粒要求不是很高，尽量选择便宜的就可以了。