一:质粒DNA转化实验,实验结果怎么写
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二:质粒DNA的提取及其酶切检测的实验报告怎么写
质粒DNA的提取及其酶切检测的实验报告怎么写
实验目的:
1.掌握限制性核酸内切酶消化DNA的原理。
2.掌握重组质粒DNA的酶切鉴定方法。
3.掌握琼脂糖凝胶电泳分析酶切结果。
基本原理
限制性核酸内切酶是一类能识别双链DNA中特定碱基顺序的核酸水解酶(水解磷酸二酯键)。根据酶的识别切割特性、催化条件及是否具有修饰酶活性,可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型三大类。通常所指的DNA限制性核酸内切酶就是Ⅱ型酶。
三:双荧光素酶报告基因实验怎么转染目的和内参两种质粒
成像的话一般荧光显微镜、激光共聚焦显微镜;定量的话一般就是流式细胞仪吧。
四:质粒DNA的提取及其酶切检测的实验报告怎么写
质粒DNA的提取及其酶切检测的实验报告怎么写
实验目的:1.掌握限制性核酸内切酶消化DNA的原理。
2.掌握重组质粒DNA的酶切鉴定方法。
3.掌握琼脂糖凝胶电泳分析酶切结果。
基本原理
限制性核酸内切酶是一类能识别双链DNA中特定碱基顺序的核酸水解酶(水解磷酸二酯键)。根据酶的识别切割特性、催化条件及是否具有修饰酶活性,可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型三大类。通常所指的DNA限制性核酸内切酶就是Ⅱ型酶。
五:影响本实验结果的因素有哪些 质粒dna的小量制备
1.在使用前,在溶液Ⅳ(洗涤液)加入40ml无水乙醇,然后在瓶盖上作好记号.
2.溶液Ⅱ(lysis buffer)在温度较低时,可能会产生沉淀,需先用水浴加热溶解,混匀后再使用.溶液Ⅱ易被空气中的CO2酸化,用完后应立即盖紧瓶盖.
3.最后加水溶解质粒时,可先将水加热,提高溶解度.
六:我们要交一份SDS裂解法的实验报告,急求,马上要交了,需要标明试剂名称
我去查的,希望能帮到你、、、 SDS碱裂解法制备质粒DNA提取和纯化 [适用对象] 生物工程专业 [实验学时] 8学时 一、实验目的 使学生掌握从大肠杆菌中制备质粒DNA的方法,提供实验所需载体。 二、实验原理 质粒细菌染色体外的DNA分子,其范围大小在1kb至200kb以上不等。它独立于细菌染色体外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒在基因工程中是最常用的载体。提取质粒DNA也是基因工程中最常见的实验操作。提取质粒首先进行大肠杆菌细胞的制备,制备后用碱裂解液进行细胞裂解,使细胞壁破裂,染色体DNA和蛋白质变性,将质粒DNA释放到上清中。尽管碱性溶剂使碱基配对完全破坏,闭环的质粒DNA双链仍不会彼此分离,这因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。 而裂解过程中,细菌蛋白、破裂的细胞壁和变性的染色体DNA会相互缠绕成大型复合物,后者被十二烷基硫酸盐包盖。当用钾离子取代钠离子时,这些复合物会从溶液中有效地沉淀下来。离心除去变性剂后,就可以从上清中回收复性的质粒DNA,最后用聚乙二醇沉淀法进行质粒的纯化。对于小量制备的质粒DNA,经过苯酚、氯仿抽提,RNA酶消化和乙醇沉淀等简单步骤去除残余蛋白质和RNA,所得纯化的质粒DNA已可满足细菌转化、DNA片段的分离和酶切、常规亚克隆及探针标记等要求,故在分子生物学实验室中常用。 三、仪器设备 培养皿 摇床 天平 高速离心机(×12000g) 微量移液器(2-20μl、20-200μl、200-1000μl)、电泳仪、微波炉。 四、相关知识点 本课程知识点综合:涉及到质粒DNA提取过程、质粒纯化过程和琼脂糖凝胶电泳技术。 多课程知识点的综合:微生物学细菌的培养和质粒抽提技术。 五、实验步骤 细胞培养 接种培养 挑取LB固体培养基上生长的单菌落,接种于2.0ml LB(含相应抗生素)液体培养基中,37℃、250g振荡培养过夜(约12-14hr)。 离心 取1.5ml培养物入微量离心管中,室温离心8000g×1min,弃上清,将离心管倒置,使液体尽可能流尽。 细胞的裂解 悬浮细菌沉淀 将细菌沉淀重悬于100μl预冷的碱裂解溶液Ⅰ中,剧烈振荡,使菌体分散混匀。(为确保细菌沉淀在碱裂解溶液Ⅰ中完全分散,将两个微量离心管的管底互相接触同时涡旋振荡,可以提高细菌沉淀重悬的速度和效率。) 裂解细菌悬液 加200μl新鲜配制的溶液Ⅱ,颠倒数次混匀(不要剧烈振荡),并将离心管放置于冰上2-3min,使细胞膜裂解(溶液Ⅱ为裂解液,故离心管中菌液逐渐变清)。 沉淀染色体和蛋白质 加入150μl预冷的溶液Ⅲ,将管温和颠倒数次混匀,见白色絮状沉淀,可在冰上放置3-5min。溶液Ⅲ为中和溶液,此时质粒DNA复性,染色体和蛋白质不可逆变性,形成不可溶复合物,同时K+使SDS-蛋白复合物沉淀。 沉淀多余的蛋白质 加入450μl的苯酚/氯仿/异戊醇,振荡混匀,4℃离心12000g × 10min。小心移出上清于一新微量离心管中。 质粒DNA的回收 沉淀核酸 加入2.5倍体积预冷的无水乙醇,混匀,室温放置2-5min,4℃离心12000g×15min。 洗涤沉淀 1ml预冷的70%乙醇洗涤沉淀1-2次,4℃离心8000g×7min,弃上清,将沉淀在室温下晾干。 溶解质粒DNA 沉淀溶于20μl TE(含RNase A 20μg/ml),37℃水浴30min以降解RNA分子,-20℃保存备用。 质粒DNA电泳检测 制胶 用封边封住塑料托盘开放的两边,形成一个模具,置于一个水平支架上。加上梳子。称取琼脂糖0.5g,......余下全文>>