免疫组化阴性对照

一：免疫组化有阴性对照吗

看你检测是什么指标， 常用抗体只需要做阳性对照，不常用的要做阳性对照、阴性对照或抗体最佳稀释实验， 通常我的研究生都只每个切一张即可， 实验结论中注明已做相关对照实验即可。

另外对于50例这种小样本，做组织芯片要好的多。具体请参考相关资料。

二：免疫组化her2的阳性对照组的标志

第18外显子D842Y突变（少见）

第19外显子del746-A750缺失

第21外显子L858R突变

第18外显子G719突变（罕见）

第21外显子L861突变（罕见）

第20外显子突变

三：免疫组化显示:CK(+),CK5/6(-),ER(-),PR(-),E-cad(+),Her-2(

ER、PR阴性，HER2假阳性，是三阴性乳腺癌，预后不好；

ki67中等阳性，提示癌细胞增殖较为活跃，预后较差。

四：免疫组化技术的前言

——1941年 Coons 首先用荧光素标记抗体—检测肺组织内的肺炎双球菌获得成功。—— 60年代 Nakane建立酶标抗体技术——铁蛋白标记Ab技术。—— 70年代 Stemberger 改良上述技术，建立辣根过氧化物酶——抗体过氧化物酶（PAP）技术，使免疫细 胞化学得到广泛应用。—— 80年代 Hsu 等建立了抗生物素—生素（ABC）法之后，免疫金—银染色法、半抗原标记法、免疫电镜 技术相继问世。—— 90年代 分子杂交技术、原位杂交技术、免疫细胞化学分类方法迅速发展。——2000年 各种免疫组化技术更加成熟，使免疫组化技术成为当今生物医学中形态、功能代谢综合研究的 一项有力工具。其应用范围深达医学各个学科，是目前生命科学工作者应该掌握的基本技术之一。 （1）根据染色方式分成：① 贴片染色② 漂浮染色（2）根据Ag—Ab结合方式分成：① 直接法② 间接法③ 多层法（3）按标记物的性质分成：① 免疫荧光技术（免疫荧光法）② 免疫酶技术（酶标抗体法、桥法、PAD 法、 ABC法）③ 免疫金属技术（免疫铁蛋白法、免疫金 染色法、蛋白A金法） （1）必要性：组织细胞内Ag—Ab结合反应一般是不可见的，若在镜下检测，则必须具有可视性标记物。（2）常用标记物① 荧光素：最常用的是异硫一氰酸荧光素（Fluorescein isothiocyanate ，FITC） —— 荧光显微镜下 呈绿色荧光四乙基罗达明（rho—damine RB200）——荧光显微镜下发橙红色荧光② 酶：辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶。③ 生物素：（Biotin）④ 铁蛋白金等：主要应用于免疫电镜。其他：如同位素（因涉及污染和防护难一般不用） 1．直接法荧光素直接标记特异性抗体（—抗）上，标记抗体与抗原结合（在切片上）荧光显微镜下观察→检测抗 原。△ 酶标抗体要显示后镜检。直接法优点：简单，时间短，特异性强。 缺点：灵敏度低，所需抗体量大（不经济）。 应用：基本不用！2．间接法 荧光素标记在二抗上（二抗：抗产生一抗动物的 IgG抗体）。※显色后镜检特点：较直接法灵敏，可标记一种抗体→ 鉴定多种抗原。3．非标记Ab桥法：“桥法”是酶标记抗体的改进，经过三次抗体，其二抗为未标记桥抗体。（1）单桥法(2)双桥法在三抗之后，将二抗和三抗再重复一次，可增大染色强度。★ 特别提示：注意动物种属关系4．PAP法（过氧化物酶—抗过氧化物酶法 Peroxidase anti—peroxidase method， PAP法）~ 是桥法的改良，既先形成PAP复合物→抗原—抗体—抗IgG抗体—PAP复合物。该法简化了操作步骤，提高了灵敏度，所染标本可长期保存。5．ABC法（亲和素—生物素—过氧化物酶复合物法，Avidin—biotin—peroxidase Complex method，ABC 法）Avidin： 亲和素，一种糖蛋白，其上有4个与生物素相结合的位点。Biotin ： 生物素—维生素H，两者亲和力巨大，牢不可破。ABC法与PAP法的区别是：以ABC复合物代替PAP复合物。（1）ABC复合物的制备：（2）ABC法反应原理6．SP或SAP法（过氧化物酶标记的链霉卵 白素或过氧化物酶标记的碱性磷酸酶染 色） Streptavidin/peroxidase or strepta- vidin/alkaline phosphatase）※ 该法是ABC法基础上的进一步改良，使卵白素与链霉（而非生物素）结合，而后再结合PO 。它有4个亚基可与生物素......余下全文>>