蓝白斑筛选的分子机制

一:蓝白斑筛选的蓝白斑筛选原理

蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法: 是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点(MCS),它并不破坏读框,但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能,这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞。因此,宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性,但它们同时存在时,可形成具有酶学活性的蛋白质。这样,lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补,称为α-互补。由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下,在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落,因而易于识别。然而,当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后,几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段,使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选,又称为蓝白斑筛选。如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的钙化菌平板37℃温箱倒置培养12-16hr后,有重组质粒的细菌形成白色菌落。

二:基因工程中蓝白斑筛选的原理是什么

蓝白筛选 当外源片段插入到pBS质粒的多克隆位点上后会导致读码框架改变, 表达蛋白失活, 产生的氨基酸片段失去α-互补能力, 含重组质粒的转化子在生色诱导培养基上只能形成白色菌落。 而 没有重组质粒的转化子产生α-互补,在生色底物X-gal(5-溴-4氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)下存在下被IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)诱导形成蓝色菌落。

三:蓝白斑筛选中可能出现的结果有哪几种,简要说明出现的原因

在进行蓝白斑筛选的时候,出现了两个奇怪现象:

一、我的空白载体转的大肠杆菌不但出现了蓝斑而且还有白斑。

二、连有目的基因的载体转的大肠杆菌出现了好多蓝色小点点,看起来不像是细菌。

不知道是什么原因,我的大肠杆菌是做过氨苄对照测试的,应该没有杂菌的。

四:蓝白斑筛选的简介

蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法,是根据载体的遗传特征筛选重组子,如a-互补 、抗生素基因等。蓝白斑筛选是在指示培养基上,重组质粒的菌落是白色的,非重组质粒的菌落是蓝色的,以颜色不同为依据直接筛选重组克隆的方法 。

五:比较蓝白斑筛选法与插入失活法筛选的优缺点

插入失活法在含抗性培养基中培养后并不能直接得到所需的重组体。而是需要进行菌落平板的影印复制, 才能够将所需的重组体挑选出来。蓝白斑筛选可以直接通过颜色判断抗性培养基中的所需重组体,并且两种抗性可以在同一培养基中同时筛选,大大提高了效率。蓝白斑筛选的所需工程菌为β半乳糖苷酶缺陷型菌株。

六:简述蓝白斑筛选的原理。

白斑分好多种 白癜风是其中的一种 白癜风属于难治性疾病,最大特点易复发和扩散,目前治疗白癜风的药物有很多种,但是每一种药物都有一定的适应症,不一定适合所有患者,治疗不对症还会加重病情,使机体产生抗药性与耐药性,更何况白癜风发病诱因有几十种,病因病情不同选择的治疗方案也是不一样的,根据你的病情建议及时到国家正规的专业治疗白癜风的科研机构系统病因检测,查明黑色素缺失诱因,从根源入手针对性治疗,是解决白癜风的最佳途径。

七:如何设计质粒载体进行蓝白斑筛选

先连接T载体是为了提高转化效率一般来说市面上出售的T载体都进行了优化,容易连接片段(也就是效率较高),因此构建表达载体时有时会先连接T载体。同时T载体的测序引物比较明确(商业化的缘故),因此测序也方便一些。更重要的是,T载体往往设计了蓝白斑筛选的功能,插入片段的载体会呈现白色,这样也容易区分验证,不用每个单菌落都拿去做colony PCR或提质粒酶切验证。当然也不是绝对的,我们实验室就经常直接把片段酶切后连接表达载体,不经过T载体这一步,其实影响并不大。如果你的情况比较特殊(比如片段较大,或是对应的表达载体拷贝数较低等),可以考虑连接T载体,不然的话不是非常必要。

扫一扫手机访问

发表评论