牛津杯抑菌

一：如何使用牛津杯做抑菌试验/药敏实验

一、实验原理

1、将培养基平板置培养箱中培养，一方面试验菌（指示菌）开始生长繁殖；另一方面抗生素呈球面扩散，形成递减的梯度浓度，离杯越近，抗生素浓度越大，离杯越远抗生素浓度越小。

2、在牛津杯周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。

3、抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度（药敏实验）或药物对指示细菌的抑菌程度（抑菌试验）。

4、抗生素浓度越高，抑菌圈越大。

5、在抑菌圈的边缘处，琼脂培养基中所含抑菌物质的浓度即为该菌悬液中对该种指示菌的最低抑菌浓度（MIC） 。

6、抑菌圈直径与药物对测试菌的最低抑菌浓度 呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。

二、实验材料

培养基：牛肉膏蛋白胨固体培养基

菌种：大肠杆菌（E.coli)、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)

药品：阿莫西林、黄芪多糖、

其他：牛津杯、培养皿、酒精棉、酒精灯、涂布器、移液枪、1mL、200uL枪头、恒温培养箱、超净工作台、接种环

“牛津杯”可从东台市吉泰不锈钢制品厂采购，牛津杯是内径为6mm，外径为8mm，高10mm的圆筒形管子，管子的重量尽可能相等。

三、实验操作

1. 倒平板：将已灭菌的琼脂培养基加热到完全融化，倒在培养皿内，每皿约20ml，凝固。

2. 标记：菌种、牛津杯摆放位置、药物及其 浓度

3. 制备菌悬液：用生理盐水洗下试管内的菌苔并稀释。

4. 菌液涂布：吸取1mL 菌液入平板表面，用涂布器涂布将菌液涂布均匀

5. 摆放牛津杯：在培养基表面垂直摆放牛津杯，轻轻加压，使其与培养基接触无空隙。

6.加入待检药液：在杯中加入不同稀释度的药液或待检样品。

7. 孵育：加满后在37 ℃培养16~18 h。

8. 结果报告：用毫米尺量取抑菌圈直径，参考表的标准判读结果，按敏感（S）、中介（I）、耐药（R）报

以牛津杯周围没有肉眼可见生长物区域为抑菌圈，根据抑菌圈直径大小判断细菌对抗菌药的敏感性。

抑菌试验结果判定标准：抑菌圈直径（毫米）

二：牛津杯抑菌试验 25分

我看过的文献中似乎是不去除牛津杯本身的直径的。毕竟使用的牛津杯规格一定，那么直径、厚度、高度和材质也就一致了。

与其考虑牛津杯直径的问题，还不如考虑一下应当把培养基倒得更加均匀一些，使其厚度和干湿度相同，这样抗生素在其中的扩散才是均一的。

至于计算抑菌圈大小，就是计算抑菌圈的直径了，然后取平均值。

三：用牛津杯做抑菌实验为什么要用双层琼脂平板法

用双层琼脂平板的话，底层琼脂层可以提供一个尽量水平的底部，减少因为培养皿底部不均匀造成的误差，当然摆放的时候要在尽量水平的操作平台上面使其凝固。

四：牛津杯抑菌试验

牛津杯直接放在培养基上，加入样品即可。

抑菌圈用尺直接量就可以了。

五：牛津杯抑菌圈不明显 求教

1、洗净牛津杯；

2、重配抗生素（或试验材料）溶液，一定要达到所需要浓度且无污染；

3、加样后先置摄氏4度冰箱静置1个小时，之后才培养。

看是否有效。

六：采用牛津杯测定食品抑菌剂对不同微生物的抑菌效果应注意哪些问题

（1）加注的培养基如果温度太低，就容易结块不能均匀铺开，应为60-80oC.加注培养基底层之后，不应该立即给双碟加盖，以避免形成水蒸气。

（2）可以事先把配制好的培养基分装在具塞试管内，每管5mL，湿热灭菌后放在50 oC水浴锅内保温。试验中，再分别加入菌液混匀，配制成带菌琼脂，继续保温5min使培养基温度回升，倒在底层培养基上，迅速转动双碟使培养基均匀铺开。

（3） 放置小钢管时，注意管与管之间、管与双碟边缘不能太靠近。

（4）滴加时离钢管口距离不要太高，一旦滴管中出现气泡或者残留，就重新吸取抗生素溶液进行滴加，滴管口应避免太细。滴加时若有溅出，可用滤纸片轻轻吸去。滴加后，液面应与小钢管口齐平，液面反光显黑色。

（5） 双碟放入培养箱内，要与箱壁保持一定的距离，双碟叠放不能超过3个。

（6）测量抑菌圈直径时，不易取去小钢管或把双碟翻转过来测量抑菌圈直径。

七：请问谁用过牛津杯做抑菌试验啊

有几种方法，你可以查抑菌方面的文献，枯草芽孢杆菌的很多都是通过次级代谢物产生抑菌效果，因此这方面的文献很多，

我比较清楚的有以下两种，

一、在平板上先倒一层很薄的素琼脂，待凝固后，再将牛津杯放在上面，然后想平板中倒混有菌体的培养基，凝固后，想牛津杯中注入发酵液，发酵液一般是经过离心的上清液，

二、倒平板，在平板上涂布病原菌，把牛津杯放在上面然后向牛津杯中注入发酵液，

牛津杯一般可以装240微升