粗蛋白的测定方法

一：如何选择合适的蛋白含量测定方法

常用紫外分光光度法测定蛋白质含量。

以下引用：

6种方法测定蛋白质含量

一、微量凯氏（kjeldahl）定氮法

样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下：

nh2ch2cooh+3h2so4——2co2+3so2+4h2o+nh3 (1)

2nh3+h2so4——(nh4)2so4 (2)

(nh4)2so4+2naoh——2h2o+na2so4+2nh3 (3)

反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。

为了加速消化，可以加入cuso4作催化剂，k2so4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。

计算所得结果为样品总氮量，如欲求得 样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白

氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。

二、双缩脲法（biuret法）

（一）实验原理

双缩脲（nh3conhconh3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与cuso4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。

紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、tris缓冲液和某些氨基酸等。

此法的优点是较快速 ，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。

（二）试剂与器材

1. 试剂：

（1）标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（bsa）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用bsa浓度1mg/ml的a280为0.66来校正其纯度。如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标准蛋白质溶液。牛血清清蛋白用h2o 或0.9%nacl配制，酪蛋白用0．05n naoh配制。

（2）双缩脲试剂：称以1.50克硫酸铜（cuso4•5h2o）和6.0克酒石酸钾钠（knac4h4o6•4h2o），用500毫升水溶解，在搅拌下加入300毫升10% naoh溶液，用水稀释到1升，贮存于塑料瓶中（或内壁涂以石蜡的瓶中）。此试剂可长期保存。若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制。

2. 器材：

可见光分光光度计、大试管15支、旋涡混合器等。

（三）操作方法

1. 标准曲线的测定：取12支试管分两组，分别加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升的标准蛋白质溶液，用水补足到1毫升，然后加入4毫升双缩脲试剂。充分摇匀后，在室温（20～25℃）下放置30分钟，于540nm处进行比色测定。用未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照液。取两组测定的平均值，以蛋白质的含量为横座标，光吸收值为纵座标绘制标准曲线。

2、样品的测定：取2～3个试管，用上述同样的方法，测定未知样品的蛋白质浓度。注意样品浓度不要超过10mg/ml。

三、folin—酚试剂法（lowry法）

（一）实验原理

这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法，由于其试剂乙的配制较为困难（现在已......余下全文>>

二：蛋白质含量测定的基本方法有哪些

pro的测定方法分为两大类：一类是利用pro的共性，即含氮量，肽链和折射率测定pro含量，另一类是利用蛋白质中特定氨基酸残基、酸、碱性基团和芳香基团测定pro含量。但是食品种类很多，食品中pro含量又不同，特别是其他成分，如碳水化合物，脂肪和维生素的干扰成分很多，因此pro的测定通常利用经典的剀氏定氮法是由样品消化成铵盐蒸馏，用标准酸液吸收，用标准酸或碱液滴定，由样品中含氮量计算出pro的含量。由于食品中pro含量不同又分为凯氏定氮常量法、半微量法和微量法，但它们的基本原理都是一样的。

三：测定蛋白质含量的主要方法有哪些

测定蛋白质含量的主要方法有哪些？

四：测定蛋白质含量的方法有哪些

测定蛋白质的定量方法有很多，目前常用的有：

1、染料法，

2、双缩脲(Biuret)法，

3、酚试剂法(Lowry)法

4、紫外吸收法

具体可以参看：zhidao.baidu.com/...ishq=1

五：国家标准检测蛋白质含量测定方法

使用凯氏定氮的方法检测蛋白质含量。

凯氏定氮法 凯氏定氮法

蛋白质测定的国标规定方法——凯氏定氮法介绍

【GB/T 5009.5—1985】

食品中蛋白质的测定方法

本标准适用于各类食品中蛋白质的测定。

1 原理

蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。

2 试剂

所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制。

2.1 硫酸铜。

2.2 硫酸钾。

2.3 硫酸。

2.4 2%硼酸溶液。

2.5 混合指示液：1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。也可用2份0.1%甲基红乙醇溶液与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合。

2.6 40%氢氧化钠溶液。

2.7 0.05N硫酸标准溶液或0.05N盐酸标准溶液。

3 仪器

定氮蒸馏装置：如图所示。

（图略）

4 操作方法

4.1 样品处理：精密称取0.2～2.0g固体样品或2～5g半固体样品或吸取10～20ml液体样品(约相当氮30～40mg)，移入干燥的 100ml或500ml定氮瓶中，加入0.2g硫酸铜，3g硫酸钾及20ml硫酸，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45°角斜支于有小孔的石棉网上。小心加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热0.5h。取下放冷，小心加20ml 水。放冷后，移入100ml容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸按同一方法做试剂空白试验。

4.2 按图装好定氮装置，于水蒸气发生瓶内装水至约2/3处，加甲基红指示液数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸，用调压器控制，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。

4.3 向接收瓶内加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示液1滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取10.0ml样品消化稀释液由小玻杯流入反应室，并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内，塞紧小玻杯的棒状玻塞。将10ml 40%氢氧化钠溶液倒入小玻杯，提起玻塞使其缓缓流入反应室，立即将玻塞盖紧，并加水于小玻杯以防漏气。夹紧螺旋夹，开始蒸馏。蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，蒸馏5min。移动接受瓶，使冷凝管下端离开液面，再蒸馏1min。然后用少量水冲洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以0.05N硫酸或0.05N盐酸标准溶液滴定至灰色或蓝紫色为终点。

同时吸取10.0ml试剂空白消化液按4.3操作。

4.4 计算

式中：X——样品中蛋白质的含量，%；

V1——样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积，ml；

V2——试剂空白消耗硫酸或盐酸标准液的体积，ml；

N——硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度；

0.014——1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数；

m——样品的质量(体积)，g(ml)；

F——氮换算为蛋白质的系数。蛋白质中的氮含量一般为15～17.6%，按16%计算乘以6.25即为蛋白质，乳制品为6.38，面粉为5.70，玉米、高粱为6.24，花生为5.46，米为5.95，大豆及其制品为5.71，肉与肉制品为6.25，大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83，芝麻、向日葵为 5.30。

附加说明：

本标准由全国卫生标准技术委员会食品卫生标准分委员会提出，由卫......余下全文>>

六：有谁能告诉我怎样测定鱼粉的粗蛋白？他的具体操作步骤。

1 鱼粉质量标准概述

鱼粉目前国内执行的标准为SC／T3501—1996[1]具体指标为感观指标：色泽、组织、气味三项，理化指标：粉碎粒度、粗蛋白，粗脂肪、水分、盐分、灰分、砂分七项，标准中还规定了鱼粉中不允许添加非鱼粉原料的含氮物质，诸如植物油饼粕、皮革粉、羽毛粉、尿素、血粉等，亦不允许添加加工鱼露后的废渣。鱼粉的卫生指标应符合GBl3078—2001饲料卫生标准的规定[2]，

具体指标有：砷、铅、氟、霉菌、汞、镉、亚硝酸盐、滴滴涕、细菌总数等9项，SC／T350l—1996标准还规定了鱼粉不得有虫寄生，还单独列出鱼粉中金属铬(以六价铬计)允许量小于10mg／kg。并把鱼粉酸价作为强制性指标，在用户或检验机构提出时才进行检验，其酸价指标有明确规定，最低等级的鱼粉的酸价要求小于(等于)7mg KOH／g。以上所述是国家标准所规定的鱼粉的具体技术指标要求。有关资料[3～6]介绍判定鱼粉质量的营养指标还应测定真蛋白质、动物蛋白的胃

蛋白酶消化率，卫生指标还应测定乙氧基喹、甲醛等指标。

鱼粉的掺假检验有许多项目，其中主要有掺羽毛粉、骨粉、木质素、鞣革粉、碳酸钙粉、贝壳粉、蛋壳粉、淀粉质、粗纤维类物质、血粉、杂饼粉、尿素态氮、氨态氮等多项，掺假检验属定性检验，SC／T350l—1996标准中规定有鱼粉内杂质的显微镜鉴别方法，但只能作出杂质的确认，无法作出定量的结论，没有确切的数据说明其质量情况，作者认为要做完上述检验是一件很麻烦的事，在日常的生产检验中，企业只要掌握好以下几项定量分析的指标，就能较确切地反映出鱼粉质量的情况，现将这些分析项目及操作方法概述如下：

2 在日常生产的质量控制中如何运用定量化学分析方法检验鱼粉的质量

饲料生产厂家和经销商如何运用定量化学分析方法检验和判定鱼粉的质量，是一个至关重要的问题。作者从多年生产实践中总结出定量化学分析检验鱼粉的质量，主要抓好如下几个检测项目的检验。

2．1 粗蛋白质的检验

粗蛋白质的含量是检验鱼粉质量的主要项目，国家行业标准以粗蛋白质含量作为衡量鱼粉质量和分等级的主要指标，也是首要的检测项目，按照GB／T6432[7]的规定测定粗蛋白质的准确度、精密度高，是经典的检测方法，但该方法耗费试剂，消解时间长，资料介绍的强碱直接蒸馏快速测定法、提高消化温度快速测定法、H2SO4-H2O2快速消解测定法都是可以运用于生产实践的测定方法。作者在生产实践中常用H2S04—H2O2快速消解法测定粗蛋白，这是一种快速易于掌握的常规分析方法，与国家标准测定的结果基本一致。至于蒸馏装置的运用方面，全量蒸馏装置的准确度、精密度高，但蒸馏时间长；半微量蒸馏装置的速度较快，但操作上要掌握好才能满足准确度的要求。作者设计配套的快速定氮装置[8]，是一种加热抽气吸收滴定装置，集加热蒸馏吸收于一体，不用冷却水(即不用冷凝管)，可连续进行样品的测定而不需要更换器皿，整个测定过程约10min完成；测定准确度、精密度也较高，在生产实践应用效果良好(见图1)。

2．2 真蛋白质的检验

在生产实践中证明，光测定鱼粉粗蛋白质一项指标是不能确定其质量等级的，因为粗蛋白质含量是通过测定总氮的含量，再乘以6．25的系数而得出来的，它不能排除非蛋白质的干扰，关于非蛋白氮的概述和检测方法，许多资料都有介绍，从动物学的营养角度来说，测定真蛋白质的含量是较为重要的，目前测定真蛋白质的含量的方法还没有列入国家标准，但许多出版的资料和国家教育部门的正规教材早有介绍，它们所介绍的测定方法的基本原理、操......余下全文>>