培养大肠杆菌的培养基

一:大肠杆菌培养基

一般大肠杆菌都使用LB 培养基,

其成分如下:

胰化蛋白胨 10g/L

酵母提取物 5g/L

NaCl 10g/L

如果是固体的培养基,就需要再加入15克琼脂粉

pH 7.4~7.6

实验室里,配好之后就去灭菌锅里灭菌就好了。

看看另外一个网友的相似的答案,希望对你有启发:)

LB培养基是互种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基。它含有酵母提取物、蛋白胨和NaCl。其中酵母提取物为微生物提供碳源和能源,磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源,而NaCl提供无机盐。

在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化,一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化,以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固,通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。

二:大肠杆菌培养基常用的培养基有哪几种

一般大肠杆菌都使用LB 培养基。

LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基。它含有酵母提取物、蛋白胨和NaCl。其中酵母提取物为微生物提供碳源和能源,磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源,而NaCl提供无机盐。

在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化,一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化,以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固,通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。

三:最适合大肠杆菌生长的培养基是什么培养基

最适合 大肠杆菌生长的培养基是NA培养基,即牛肉膏蛋白胨培养基,培养基的配方 (g/L)

牛肉浸膏3.0

蛋白胨 5.0

葡萄糖 2.5

琼脂 18.0

pH值7.0±0.1

温度25℃

四:大肠杆菌培养基

培养基的基本成分

一般的培养基均需要碳源、氮源、无机盐和水等(具体见教材15页“100mL牛肉蛋白胨培养基的营养构”)。

(一)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基

1.牛肉膏蛋白胨固体培养基配方(即计算)

物质

牛肉膏

蛋白胨

NaCl

琼脂

重量

5g

10g

5g

20g

定溶至1000mL

2.称量

按比例称取各种物质,注意事项:牛肉膏要放在称量纸上称量,牛肉膏、蛋白胨都易吸潮,称取时动作要迅速,称后及时盖上瓶盖。

3.溶化:先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯,加少量水,加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后,用玻璃棒取出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠,用玻璃棒搅拌使之溶解,再加入琼脂,搅拌,待溶解后,加自来水定溶至100mL。

4.灭菌:将配制好的培养基放到锥形瓶中(瓶口加棉塞,包上牛皮纸),连同培养皿(3~5套,用几层报纸包好)一起放到高压锅内灭菌。

5.倒平板:待培养基冷却到50OC左右时倒平板(如教材17图示)。

(二)纯化大肠杆菌

微生物接种方法常见的有平板划线法和稀释涂布平板法。

1.平板划线法

通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面

在数次划线后可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体称菌落。

2.稀释涂布平板法

(1)将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释

度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行

培养。

(2)在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物

将分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单

个的菌落。

(3)稀释涂布平板法操作过程分两个步骤,

即系列稀释操作和涂布丁板操作。

系列稀释操作

(1)将分别盛有9mL水的试管灭菌并编号。

(2)用移液管吸取1mL培养的菌液,注入第二支试管中,轻压橡皮头,吹吸三次使之充分混匀。

(3)从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液,注入第三支试管中,重复步骤2,直至到第六支试管。

涂布平板操作

(1)将涂布器浸在盛有70%的酒精的烧杯中。

(2)取少量菌液(不超0.1mL),滴加到培养基表面。

(3)将沾有酒精的涂布器在火焰上引燃,火熄后冷却

8~10s。

(4)用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。

3.培养12h和24h后,观察到的实验结果相同吗?如果不同,请分析产生差异的原因?

培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同。随着时间的延长、菌落的不断生长,使菌落不断增大。...余下全文>>

五:大肠杆菌液体培养基是什么? 可以用LT培养基吗?

用于大肠杆菌的液体培养基:

GYT培养基(Tung and Chow 1995)

10%(v/v)甘油

0.125%(m/v)酵母提取物

0.25%(m/v)胰化蛋白胨

使用0.22um滤器过滤除菌,分装成2.5ml一份,保存于4℃。

LB(Luria-Bertani)培养基

配制每升培养基,应在950ml去离子水中加入:

胰化蛋白胨 10g

酵母提取物 5g

NaCl 10 g

摇动容器直至溶质溶解。用5mol/L NaOH(约0.2ml)调pH值至7.0。用去离子水定容至1L。在15psi(1.05kg/cm2)高压下蒸汽灭菌20min。

M9培养基

配制1L培养基,应在750m1无菌去离子水(冷至50℃或50℃以下)中加入:

5×M9盐溶液 200ml

1 mol/LMgSO4 2 ml

适当碳源的20%溶液(如20%葡萄糖) 20ml

1 mol/LCaCl2 0.1 ml

灭菌的去离子水至980ml。

如果需要,可在M9培养基中补加适当氨基酸和维生素的贮存液。

5×M9盐溶液配制:用无离子水溶解下列盐类,终体积为1L:

Na2HPO4·7H2O 64g

KHPO4 15g

NaCl 2.5g

NH4Cl 5.0g

分装成200ml一份,在15psi(1.05kg/cm2)高压下蒸汽灭菌15min。

分别配制MgSO4溶液和CaCl2溶液,高压灭菌。用无菌水将5×M9盐溶液稀释至980ml后,加入MgSO4和CaCl2溶液。葡萄糖溶液在加到稀释的M9盐溶液之前,用0.22um滤器过滤除菌。当使用含有染色体上脯氨酸生物合成操纵子缺陷[△(lac-proAB)]的大肠杆菌以及互补的proAB基因在F'质粒上时,在M9基本培养基中补加下列成分:

0.4%(m/v)葡萄糖(右旋糖)

5mM MgSO4·7H2O

0.01%硫胺

NZCYM培养基

配制每升培养基,在950ml去离子水中加入:

NZ胺 10g

NaCl 5g

酵母提取物 5g

酪蛋白水解物 1g

MgSO4·7H2O 2g

摇动容器直至溶质完全溶解。用5mol/L NaOH(约0.2ml)调pH值至7.0。用去离子水定容至1L。

在15psi(1.05kg/cm2)高压下蒸汽灭菌20min。

NZ胺:酪蛋白酶促水解物(ICN Biochemicals公司)。

NZCYM、NZYM和NZM也可用BD Biscienses公司的脱水培养基。

NZYM培养基

NZYM培养基除不含酪蛋白水解物外,其他成分与NZCYM培养基相同。

NZM培养基

NZM培养基除不含酵母提取物外,其他成分与NZYM培养基相同。

SOB培养基

配制每升培养基,在950ml去离子水中加入:

胰化蛋白胨 20g

酵母提取物 5g

NaCl 0.5 g

摇动容器使溶质完全溶解。加10ml 250mmol/L KCl溶液(将1.86g KCl用100ml去离子水溶解即配成250mmol/l KCl溶液)。用5mol/L NaOH调pH值至7.0。用去离子水定容至1L。在15 psi(1.05kg/cm2)高压下蒸汽灭菌......余下全文>>

六:大肠杆菌培养基怎么制作

大肠杆菌培养基比较简单,用普通的营养琼脂培养基即可,市场上有售,按照说明书直接配置就可。

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