一:大肠杆菌液体培养基里面的大肠杆菌计数有什么比较好
细胞计数一定要有血球计数板,不然计数不仅效率低,而且不准确
血球计数板介绍及使用方法:
使用前一定记住先稀释培养液,这样可以提高效率、准确度
最后也不要忘记数据要乘以稀释倍数
二:大肠杆菌液体培养基是什么? 可以用LT培养基吗?
用于大肠杆菌的液体培养基:
GYT培养基(Tung and Chow 1995)
10%(v/v)甘油
0.125%(m/v)酵母提取物
0.25%(m/v)胰化蛋白胨
使用0.22um滤器过滤除菌,分装成2.5ml一份,保存于4℃。
LB(Luria-Bertani)培养基
配制每升培养基,应在950ml去离子水中加入:
胰化蛋白胨 10g
酵母提取物 5g
NaCl 10 g
摇动容器直至溶质溶解。用5mol/L NaOH(约0.2ml)调pH值至7.0。用去离子水定容至1L。在15psi(1.05kg/cm2)高压下蒸汽灭菌20min。
M9培养基
配制1L培养基,应在750m1无菌去离子水(冷至50℃或50℃以下)中加入:
5×M9盐溶液 200ml
1 mol/LMgSO4 2 ml
适当碳源的20%溶液(如20%葡萄糖) 20ml
1 mol/LCaCl2 0.1 ml
灭菌的去离子水至980ml。
如果需要,可在M9培养基中补加适当氨基酸和维生素的贮存液。
5×M9盐溶液配制:用无离子水溶解下列盐类,终体积为1L:
Na2HPO4·7H2O 64g
KHPO4 15g
NaCl 2.5g
NH4Cl 5.0g
分装成200ml一份,在15psi(1.05kg/cm2)高压下蒸汽灭菌15min。
分别配制MgSO4溶液和CaCl2溶液,高压灭菌。用无菌水将5×M9盐溶液稀释至980ml后,加入MgSO4和CaCl2溶液。葡萄糖溶液在加到稀释的M9盐溶液之前,用0.22um滤器过滤除菌。当使用含有染色体上脯氨酸生物合成操纵子缺陷[△(lac-proAB)]的大肠杆菌以及互补的proAB基因在F'质粒上时,在M9基本培养基中补加下列成分:
0.4%(m/v)葡萄糖(右旋糖)
5mM MgSO4·7H2O
0.01%硫胺
NZCYM培养基
配制每升培养基,在950ml去离子水中加入:
NZ胺 10g
NaCl 5g
酵母提取物 5g
酪蛋白水解物 1g
MgSO4·7H2O 2g
摇动容器直至溶质完全溶解。用5mol/L NaOH(约0.2ml)调pH值至7.0。用去离子水定容至1L。
在15psi(1.05kg/cm2)高压下蒸汽灭菌20min。
NZ胺:酪蛋白酶促水解物(ICN Biochemicals公司)。
NZCYM、NZYM和NZM也可用BD Biscienses公司的脱水培养基。
NZYM培养基
NZYM培养基除不含酪蛋白水解物外,其他成分与NZCYM培养基相同。
NZM培养基
NZM培养基除不含酵母提取物外,其他成分与NZYM培养基相同。
SOB培养基
配制每升培养基,在950ml去离子水中加入:
胰化蛋白胨 20g
酵母提取物 5g
NaCl 0.5 g
摇动容器使溶质完全溶解。加10ml 250mmol/L KCl溶液(将1.86g KCl用100ml去离子水溶解即配成250mmol/l KCl溶液)。用5mol/L NaOH调pH值至7.0。用去离子水定容至1L。在15 psi(1.05kg/cm2)高压下蒸汽灭菌......余下全文>>
三:大肠杆菌在液体培养基中培养不出来
青岛海博培养基推荐:
1、营养肉汤常NB):主要用于一般细菌培养、转种、复壮、增菌等(GB标准)
2、营养琼脂(NA):菌落计数、不含糖,可作血琼脂基础和传代用(GB标准)
3、TTC营养琼脂:用于细菌总数测定
4、接触皿培养基:用于生产环境的菌落总数检测
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