一：原核表达 目的蛋白不表达怎么办
目的蛋白的表达跟基因本身关系密切，载体，表达条件关系也很大。空载体能表达不代表你的蛋白能在该条件下表达。
二：原核表达的介绍
广义的原核表达，是指发生在原核生物内的基因表达。狭义的原核表达，常出现于生物工程中。是指通过基因克隆技术，将外源目的基因，通过构建表达载体并导入表达菌株的方法，使其在特定原核生物或细胞内表达。
三：原核表达的原核表达系统
一个完整的表达系统通常包括配套的表达载体和表达菌株。如果是特殊的诱导表达还包括诱导剂，如果是融合表达还包括纯化系统或者Tag检测等等。选择表达系统通常要根据实验目的来考虑，比如表达量高低，目标蛋白的活性，表达产物的纯化方法等等。
四：原核表达目的基因需要加起始密码子吗
其实简单一点,可以直接克隆到表达载体上,送去测序确定之后再表达；我们以前一直这么做的；但是有些情况下,比如表达载体不是诱导型的,或者表达的蛋白对大肠杆菌宿主菌毒性很大,影响菌的生长,导致菌生长困难、提质粒困难等等,就会先克隆到一个克隆载体上面,做测序确定；然后再克隆到表达载体上.
通常来说我不太喜欢做两次克隆,总是酶切转化筛选；我喜欢选控制比较严谨的可调控性原核表达载体,比如pET系列的多个载体,直接把目的基因克隆上去.
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