原核表达载体的选择

一：原核表达载体和真核表达载体的区别

原核载矗可以将真核基因表达，但是表达出来的蛋白是没有活性的，因为缺少翻译后修饰系统。。。真核的表达载体呢 由于比较大 不适合大量快速扩增，所以要在其载体上构建可以在原核生物 如大肠杆菌中复制的所需的复制原件 。。。。综上 在应用的时候 要构建 穿梭质粒 可以穿梭于 原核和 真核 呵呵 还有就是 原核表达载体的基本元件和真核的有不同的地方 。。。。。总觉得不够正确答案 。。。。。有些人缘的蛋白在原核里没有蛋白翻译后修饰，表达后没有活性，这时候就得在真核里表......

二：常用的原核表达载体有哪些

pET系统，pGEX等

三：如何构建原核表达载体

构建表达载体首先取决于你的实验目的，例如你的实验是否要求你的蛋白表达出来必须可溶性蛋白，载体上面的标签决定了你的纯化方法，当然也决定了实验成本，等等一系列需求。 拿带标签的载体为例，因为带标签后可以增加蛋白质的可溶性，也为纯化带来了方便，一般都会采用。标签一般都是在目的蛋白的N端，这样就需要考虑读码框的问题，一定要与前面的读码框保持一致。 利用酶切连接的方法连入目的载体这个应该都知道，或者用gateway系统，非常方便，我就经常用gateway载体，构建起来速度呼呼的。 基本就是这些了吧，主要就考虑选择什么标签和读码框别错了。 有什么问题可以直接发信给我

四：真核表达载体和原核表达载体的区别越详细越全面越好

应该是原核表达宿主菌比较准确 原核表达宿主菌之前可以表达蛋白，放一段时间不表达蛋白原因很多 首先要确认其他条件是否也有改变，比如其他基因，质粒载体，表达条件等等 原核表达宿主菌保存条件没有控制好可能导致宿主菌退化，被污染等等，结果。能抑制多长时间你需要自己检测。不同细胞、不同siRNA、不同转染试剂都会影响效率。但是假设你转染之后48小时或者72小时之后passage 细胞做MTT或者克隆形成实验，个人觉得是可以的（前提是你有48小时或72小时knockdown证据）。