原核表达的步骤

一：怎样让原核表达的文章提升档次?

只做原核表达肯定不够，后续试验得接上才行

二：目前原核表达都采用什么方式，国内做原核蛋白表达服务的都有那些公司

原核表达采用的方式多位大肠杆菌系统表达，详细的实验步骤及原理，可到网上搜索相关资料。目前国内做原核蛋白表达服务的，有不少公司，但是有很多公司都是只接单不生产外包出去的，因此，找公司的时候要擦亮双眼了~也有的公司是技术达不到，实验成功率有待考究，所以可多问问几家公司对比对比，提供一点相关信息，tieba.baidu.com/p/4443692510

希望对你有所帮助~

三：通过什么方法可以判断原核表达产生的蛋白是否具有活性？

检测其下游是否受到了影响

四：求助：真核还是原核表达

区别主要在表达重组元件还有基因标记。promoter，terminater是宿主识别的的,真核可能还需要enhancer,重组到基因组中的话，需要介导重组的序列。筛选标记绝大多数不一样。

真核表达载体在宿主中以质粒形式存在的，可以复制。哺乳动物细胞里没有质粒，外源基因整合到基因组中的，所以不能扩增。由于整合多个位点而产生多拷贝。

如果说载体的重组，没区别，都是一样的酶切加连接。细菌转化也一样。真核载体在细菌中也可以进行增值。

表达的话，一般原核是直接转化细菌通过ISPG诱导进行表达，蛋白表达后的形式一般是通过包涵体或者是分泌型蛋白存在，这种蛋白如果是真核基因来源，不一定拥有相应的蛋白生物活性，因为原核表达缺少真核转录后的蛋白修饰机制。但是原核表达的蛋白容易纯化，很容易获得纯化蛋白做为免疫原等进行使用。

而真核表达则是通过脂质体或者是PEI的等转染试剂在体外通过和质粒形成复合体， 将质粒导入细胞后进行瞬时表达。称为瞬时表达的原因是因为质粒在真核细胞中不能扩增。并且不断被细胞所降解，这种表达在一定的时间后就会消失。除非质粒被整合进入细胞的基因组，通过质粒上带的筛选标记，如G418等，通过筛选得到一株稳定表达你的目的蛋白的细胞克隆。但是这种细胞克隆的表达量相比瞬时表达会非常低甚至于检测不到。真核表达的特点是所表达的蛋白一旦表达即拥有相应的生物学活性，因此真核瞬时转染往往用于研究单个基因在细胞中的功能。而不能用于纯化蛋白。

此外，真核表达还有用于昆虫细胞的杆状病毒表面展示系统，其本质也是通过转染含有目的基因的重组质粒（特殊质粒，专用于杆状病毒表面展示系统）给昆虫细胞，然后使用野生型的杆状病毒或者是人工改造过的杆状病毒来感染相应的细胞，来是病毒和质粒在昆虫细胞体内发生重组，获得目的基因，并且最终表达于病毒子的表面，所以成为表面展示系统。

五：原核表达 蛋白没有反应原性怎么办

最主要区别，原核生物基因没有内含子，不会对表达的mRNA做剪切修饰，这就使得一些真核蛋白不能正确的折叠，导致活性降低或者失活。真核细胞有一套自己的表达修饰系统，可以对类似的蛋白进行修饰。