蛋白质工程的应用

一:蛋白质工程的实际应用

提高蛋白质的稳定性包括以下几个方面:(1)延长酶的半寿期;(2)提高酶的热稳定性;(3)延长药用蛋白的保存期;(4)抵御由于重要氨基酸氧化引起的活性丧失 。葡萄糖异构酶(GI)在工业上应用广泛,为提高其热稳定性,朱国萍等人在确定第138位甘氨酸(Gly138)为目标氨基酸后,用双引物法对GI基因进行体外定点诱变,以脯氨酸(Pro138)替代Gly138,含突变体的重组质粒在大肠杆菌中表达,结果突变型GI比野生型的热半衰期长一倍;最适反应温度提高10~12℃;酶比活相同。据分析,Pro替代Gly138后,可能由于引入了一个吡咯环,该侧链刚好能够填充于Gly138附近的空洞,使蛋白质空间结构更具刚性,从而提高了酶的热稳定性。 免疫球蛋白呈Y型,由二条重链和二条轻链通过二硫键相互连接而构成。每条链可分为可变区(N端)和恒定区(C端),抗原的吸附位点在可变区,细胞毒素或其他功能因子的吸附位点在恒定区。每个可变区中有三个部分在氨基酸序列上是高度变化,在三维结构上是处在β折叠端头的松散结构(CDR),是抗原的结合位点,其余部分为CDR的支持结构。不同种属的CDR结构是保守的,这样就可以通过蛋白质工程对抗体进行改造。鼠单克隆抗体被人免疫系统排斥,它潜在的治疗作用得不到利用。嵌合抗体就是用人抗体的恒定区替代鼠单克隆抗体的恒定区,这样它的免疫原性就显著下降。如用于治疗直肠结肠腺癌(COLORECTALADENOCARCINOMA)的单克隆抗体Mab17-1A。尽管嵌合抗体还存在着免疫原的问题,但仍有几种嵌合抗体通过了临床实验。所谓人缘化抗体就是将抗原吸附区域嫁接到人抗体上,这样抗体上的外源肽链降低到最小,免疫原性也就最小。但是,仅将CDR转接到人抗体上,其抗原吸附能力很小,必须带上几个框架氨基酸残基,才能保持原有的吸附力。这样就存在免疫原性与抗原吸附力之间的矛盾。通过逐个氨基酸替代或计算机模拟分析,可在保持原有吸附力的基础之上,尽可能地降低免疫原性。第一个临床上应用的用于治疗淋巴肉芽肿病和风湿性关节炎的人缘化抗体CAMPATH-1H,尽管疗效显著,但仍有半数以上的患者有免疫反应。而其他人缘化抗体如治疗脊髓性白血病的ANTI-CD33等,其免疫反应可以忽略不计。 当前,蛋白质工程是发展较好、较快的分子工程。这是因为在进行蛋白质分子设计后,已可应用高效的基因工程来进行蛋白的合成。最早的蛋白工程是福什特(Forsht)等在1982—1985年间对酪氨酰—t—RNA合成酶的分子改造工作。他根据XRD(X射线衍射)实测该酶与底物结合部位结构,用定位突变技术改变与底物结合的氨基酸残基,并用动力学方法测量所得变体酶的活性,深入探讨了酶与底物的作用机制。佩里(Perry)1984年通过将溶菌酶中Ile(3)改成Cys(3),并进一步氧化生成 Cys(3)-Cys(97)二硫键,使酶热稳定性提高,显著改进了这种食品工业用酶的应用价值。1987年福什特通过将枯草杆菌蛋白酶分子表面的Asp(99)和Glu(156)改成Lys,而导致了活性中心His(64)质子pKa从7下降到6,使酶在pH=6时的活力提高10倍。工业用酶最佳pH的改变预示可带来巨大经济效益。蛋白工程还可对酶的催化活性、底物专一性、抗氧化性、热变性、碱变性等加以改变。由此可以看出蛋白工程的威力及其光辉前景。上述各例是通过对关键氨基酸残基的置换与增删进行蛋白工程的一类方法。另一类是以某个典型的折叠进行“从头设计”的方法。1988年杜邦公司宣布,成功设计并合成了由四段反平行α—螺旋组成为73个氨基残基的......余下全文>>

二:蛋白质工程的流程及意义

蛋白质工程的基本流程简述如下:筛选纯化需要改造的目的蛋白,研究其特性常数等;制备结晶,并通过氨基酸测序、X射线晶体衍射分析、核磁共振分析等研究,获得蛋白质结构与功能相关的数据;结合生物信息学的方法对蛋白质的改造进行分析;由氨基酸序列及其化学结构预测蛋白质的空间结构,确定蛋白质结构与功能的关系,进而从中找出可以修饰的位点和可能的途径;根据氨基酸序列设计核酸引物或探针,并从cDNA文库中获取编码该蛋白的基因序列;在基因改造方案设计的基础上,对编码蛋白质的基因序列进行改造,并在不同的表达系统中表达;分离纯化表达产物,并对表达产物的结构和功能进行检测等。

蛋钉质工程的意义:

在医药、工业、农业、环保等方面应用前景广泛,

对揭示生命现象的本质和生命活动的规律具有重要意义,

是蛋白质结构形成和功能表达的关系研究中不可替代的手段,

基础研究、应用开发。

三:蛋白质工程已有哪些实际应用

由于蛋白质的高级结构非常复制,蛋白质工程改造的实际例子并不多

实际应用常见的应该是某些蛋白质药物的使用,如干扰素

四:蛋白质工程的成果有哪些

由于蛋白质的高级结构十分复杂,所以成功的例子不多

如对胰岛素进行改造,生产速效型药品

体外耐保存的干扰素

生产高赖氨酸的玉米

以及微电子方面的应用

五:蛋白质工程中目前已成功的是(  ) A.对胰岛素进行改造,生产速效型药品 B.蛋白质工程应用于

A 1982年,用基因工程菌生产出胰岛素产品,两年后进入商品化生产,结束了完全依赖动物脏器生产胰岛素的历史。

初步估计你做的应该是学海导航。

因为CD虽然书上写了,但是你要注意书上的写法,书上说:如果怎么怎么样,就能怎么怎么样。很可能是一种假想并没有实现。

六:蛋白质工程的原理是什么?

蛋白质工程的原理是 基因改造 (练习册上的知识点)

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