无菌方法学验证

一：如何进行产品无菌检查方法的验证

目的 建立健全青霉素钠无菌检查方法，保证检验结果的准确性和可靠性。 方法 采用薄膜过滤法进行。 1.培养基及其制备方法 培养基应适合需气菌、厌气菌或真菌的生长，可按以下处方制备，亦可使用按该处 　　方生产的符合规定的脱水培养基。以下培养基制备时，均以115℃灭菌30分钟。 　　1.需气菌、厌气菌培养基(硫乙醇酸盐流体培养基) 　　酪胨（胰酶水解） 15g 氯化钠 2.5g 　　葡萄糖 5g 新配制的0.1%刃天青溶液 1.0ml 　　L－胱氨酸 0.5g (或新配制的0.2%亚甲蓝溶液0.5ml) 　　硫乙醇酸钠 0.5g 琼脂 0.5～0.7g 　　(或硫乙醇酸0.3ml) 水 1000ml 　　酵母浸出粉 5g 　　除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分加入水内，微温溶解后，调节pH为弱碱性， 　　煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH值使灭菌后为7.1±0.2，分装， 　　灭菌。 　　在供试品接种前, 培养基指示剂氧化层的颜色不得超过培养基深度约1/5，否则,须 　　经水浴煮沸加热, 只限加热一次。 2.选择性培养基 (1) 对氨基苯甲酸培养基（用于磺胺类药物的无菌检查） 照上述需气菌、厌气菌 　　培养基及真菌培养基的处方及制法，各加对氨基苯甲酸0.125g，溶解后，摇匀,分装,灭 　　菌。 　　(2) 聚山梨酯80培养基（用于油剂药品的无菌检查） 照上述需气菌、厌气菌培养基 　　及真菌培养基的处方及制法，各加10ml聚山梨酯80，摇匀，分装，灭菌。 3.操作 按该药品项下规定的方法处理后, 加入0.9%无菌氯化钠溶液或其他适宜的溶剂至少100ml中, 混合后，通过装有孔径不大于0.45μm的薄膜过滤器，然后用0.9%无菌氯化钠溶液或其他适宜的溶液冲洗滤膜至阳性对照菌正常生长。将需气菌、厌气菌培养基，真菌培养基用阳性对照管用培养基分别加至薄膜过滤器内（封闭式过滤器），或取出滤膜分成3等份,分别加入上述二种培养基中，按规定温度和时间培养。阳性对照管应根据供试品特性加入相应对照菌液1ml(抗细菌药物，以金黄色葡萄球菌为对照菌；抗厌氧菌药物，以生孢梭菌为对照菌；抗真菌药物，以白色念珠菌为对照菌)。阳性对照管细菌应在培养24～48小时，真菌应在培养24～72小时有菌生长。结果判断当阳性对照管显浑浊并确有细菌生长，阴性对照管呈阴性时，可根据观察所得的结果判定。 结果判断 如需气菌、厌气菌及真菌培养基管均为澄清或虽显浑浊但经证明并非有菌生长,均应判为供试品合格；如需气菌、厌气菌及真菌培养基管中任何1管显浑浊并确证为有菌生长，应重新取2倍量供试品，分别依法复试，除阳性对照管外，其他各管均不得有菌生长，否则应判为供试品不合格。 讨论 目前，抗生素类药物的应用非常广泛，针对每种抗生素类药物建立严格的质量标准，提高抗生素的质量就显得尤为关键。所以对一个新品种建立无菌检查法时，对其方法进行验证就显得尤为必要。薄膜过滤法作为无菌检查中的一种方法，具有准确、方便、快捷的优点，是无菌检查时所采用的一种重要方法。试验表明上述方法操作方便快捷、结果准确。所以，该无菌检查方法验证对保证结果的可信度和准确性具有重要意义。

二：更换实验室 需要重新做无菌方法验证吗

医学类的要做

三：青霉素钠无菌检查的方法验证

青霉素钠无菌检查的方法验证

目的 建立健全注射用青霉素钠无菌检查方法，保证检验结果的准确性和可靠性。方法 按中国药典2010年版二部(附录XI H)无菌检查法中的薄膜过滤法进行。

1 试验环境与材料

1．1 试验环境在环境洁净度万级、局部洁净度百级的单向流空气的菌无室中进行。

1．2 仪器智能集菌仪(杭州泰林生物技术设备有限公司)、PY330一次性全封闭集菌培养器(杭州泰林生物技术设备有限公司)、生化培养箱(苏州威尔实验用品有限公司)、霉菌培养箱(苏州威尔实验用品有限公司)、生物安全柜(苏州安泰空气技术公司)

1．3 试药注射用青霉素钠

1．4 试验用菌株金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003l、大肠埃希菌[CMCC(B)44 102]、枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]、生孢梭茵[CMCC(B)64 941]、白色念珠菌[CMCC(F)98 001]、黑曲霉[CMCC(V)98 003]。

1．5 培养基、稀释液及缓冲液1．5．1 干粉培养基 硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基、营养琼脂培养基、琼脂粉。

1．5．2 细菌稀释液0．9％ 灭菌氯化钠溶液。

1．5．3 冲洗用缓冲液pH7．0氯化钠-蛋白胨缓冲液。

2 方法与结果

2．1 菌液制备按中国药典2010年版附录ⅪH无菌检查法菌液制备法制备 。

2．2 菌落计数取金黄色葡萄球菌菌液、大肠埃希菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液各1 m1分别接种于营养琼脂培养基中，生孢梭菌接种至含1．5％琼脂的硫乙醇酸盐流体培养基中，30~C～35'E生化培养箱培养24～48 h，取白色念珠菌菌液、黑曲霉菌液各1 m1分别接种至改良马丁琼脂培养基中，经23℃ 一28~C霉菌培养箱培养48～72 h，计数。(上述各菌液分别接种两个平板，取平均值，同时设阴性对照)

2．2 方法学验证

2．3．1 试验组(样品+阳性) 取一次性全封闭集菌培养器(三联装)一套，先用少量pH7．0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液润湿滤膜，取样品15瓶溶解于250 ml缓冲液中，按薄膜过滤法过滤，样品过滤完毕后，再用pH7．0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗，每次每管注人冲洗液100 ml，充分振摇，完全排空后循环操作5次，总冲洗量达到500 ml每管。冲洗完毕后在2管中分别注人改良马丁培养基100 ml，另1管中注入硫乙醇酸盐流体培养基100 ml。另取一套集菌培养器(三联装)取本品依上述方法过滤并冲洗后，均注入硫乙醇酸盐流体培养基100 ml，将上述6管集菌培养器移至阳性对照室，于含硫乙醇酸盐流体培养基的集菌培养器中，分别接种金黄色葡萄球菌菌液、大肠埃希菌茵液、枯草芽孢杆菌菌液、生孢梭菌菌液各1 ml，于含改良马丁培养基的集茵培养器中，分别接种白色念珠菌菌液和黑曲霉菌液各1 ml，按前述规定温度培养3～5 d，观察结果。

2．3．2 阳性对照组取一次性全封闭集菌培养器(三联装)二套，4管中分别注入硫乙醇酸盐流体培养基各100 ml、2管中分别注入改良马丁培养基各100 ml，在阳性对照室内将6种菌液分别接种至相应管内，作为阳性对照，按前述规定温度培养3～5 d，观察结果。

2．3．3 阴性对照组取一次性全封闭集菌培养器(二联装)一套，滤过适量缓冲液后分别注入硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基各100 ml，作为阴性对照，按前述规定温度培养14 d，观察结果。

2．3．4 样品的无菌检查 取样品15支依上述方法同法操作，以500 ml／管的冲洗量冲洗，加入培养基后，按规定温度培养14 d，逐日观察，若培养1......余下全文>>

四：药品无菌检测验证中，去除抑菌活性常见方法有哪些？

无菌操作

五：现在买房首付的百分比是多少？

那要看你是买什么样的房子了，

一，购买二手房的话，要根据银行的政策而定，一般情况下都是40%。

二，购买新房的话，首付款是20%，其实这个首付比例也跟开发商的实厂跟楼盘的位置有关，比如说，实力小的开发商，和银行合作的机会就少一些，所以银行可能跟他定的是30%的比例，大的开发商就是20%，还有政府鼓励某一区域发展的话，那一区域开发的房子，首付比例肯定会是20%。

谢谢！

六：全封闭无菌试验过滤培养器怎么用

细胞培养箱菌水定要放硫酸铜

主要防止霉菌般都饱硫酸铜溶液放烧杯或者培养箱水槽培养箱水槽没腐蚀性

另外采用饱磷酸氢二钠盐溶液防止霉菌产

觉硫酸铜溶液些比较清亮饱候析盐结晶难看

定期往面添加菌蒸馏水别让面盐析太能效防止霉菌尤其温热季节

七：成品三批都需要做细菌和内毒素的方法学验证吗

每批次成品都需要做细菌和内毒素的方法学验证

细菌内毒素检查法在药品的热原限量控制中应用广泛，通过对无菌氯化钠溶液、配套药盒和成品的细菌内毒素检测，对生产过程进行质量控制。因此对细菌内毒素检验方法的验证就显得尤为重要。

参考文件 中国药典2010年版二部附录XI E

八：法莫替丁微生物限度检查方法学验证

2015版药典微生物学拟收载情况

检查法

①无菌检查法

②非无菌药品微生物计数法

③非无菌药品控制菌检查法

④抑菌剂效力检查法

⑤灭菌法

⑥生物指示剂抗性检查法

⑦中药饮片的微生物限度检查法

标准

非无菌药品微生物限度标准

指导原则

非无菌药品微生物限度检查指导原则

制剂通则中

制剂通则中有关制剂项下的无菌和微生物限度检查要求的修订

制剂通则中有关制剂项下的[无菌]和[微生物限度]检查要求的修订

(1)为保证用药安全，眼用液体、半固体制剂仍应符合无菌检查法的规定

(2)为保证用药安全，对用于手术、创伤、烧伤的外用制剂如鼻用制剂、软膏剂、乳膏剂、喷雾剂、气雾剂、凝胶剂、散剂、涂剂、滴耳剂等仍应符合无菌检查的规定。但在其通则无菌检查项下增加：“除另有规定外”。给予有不按无菌检查的原因

(3)在搽剂和酊剂通则项下的微生物限度检查项下增加：“除另有规定外” 。给予有可能需要按无菌检查的原因

品种正文中的无菌或微生物限度检查及其标准要求

1、受热不稳定、制剂不能进行最终灭菌的无菌工艺产品如：抗生素原料药、抗生素粉针剂正文中无菌检查的规定

2、经验证后各论化品种检查项下的：无菌…..或微生物限度……(有具体检查的规定)

3、药用敷料的无菌或微生物限度要求及标准

4、纯化水、注射用水的微生物限度要求及标准

2015年版药典的纯化水、注射用水[微生物限度]价差方法在参考欧、美药典只要用水微生物检查要求的基础上，由浙江所立课题考察、比对，在所用培养基和方法上将有较大的修订与USP35版、EP7.0版、JP16版比较，2015年版中国药典微生物学检验体系规划收载的项目和内容已基本趋向一致，将使我国药典的微生物学检验成为一个比较完备的标准体系，其意义在于：

1）全面与国际药典标准接轨；

2）从对终产品的检验向过程控制转变。

2015年版微生物学检验中的重大修订及意义

1、实验环境的重大修订

①无菌检查环境洁净度规定

②微生物限度检查环境洁净度规定

2、培养系统的重大修订

①无菌检查中培养基的修订

②微生物计数法中培养基的修订

③控制菌检查法中培养基的修订

④控制菌检查法中培养基的修订

⑤抑菌效力测定法中培养基的修订

3、对一、二、三部微生物学附录的整合、修订

与USP35版、EP7.0版、JP16版比较，2015年版中国药典微生物学检验体系规划收载的项目和内容已基本趋向一致，将使我国药典的微生物学检验成为一个比较完备的标准体系，其意义在于：

1）全面与国际药典标准接轨；

2）从对终产品的检验向过程控制转变。

培养基系统的重大修订

修订依据：

通过科研课题的建立及大量实验，以国际品牌培养基为对照，考察了中国药典微生物限度检查法、无菌检查法中所用国产培养基与USP/BP/JP中所规定的培养基的粗军生长能力比较，得出大量的实验数据，并经过可靠的统计......余下全文>>