反相硅胶柱层析

一：硅胶柱层析的硅胶柱层析流动相

极性小的用乙酸乙酯：石油醚洗脱；极性较大的用甲醇：氯仿洗脱；极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸洗脱；拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸

二：正相硅胶分不开用反相有用吗

不知道你有LCMS吗，反相柱子是基于LCMS的基础上进行分离的。

如果LCMS保留时间比较开的话，可以试一试。极性越小反相越好分。

爬小板能分开，过柱一起下来，很可能是因为你的梯度极性有点大，对于你说的反相，这个不好说，要看两者的保留时间，总的来说，能正相就不要反相。

三：使用硅胶柱层析的硅胶分离同样的样品，洗脱结束后，可以在此硅胶柱上继续上样吗？能重复上样几次

实验室实在没条件，我觉得可以重复使用的，但是在使用前我觉得应该用极性高于洗脱液极性的洗脱剂清洗，好洗脱上次样品中的杂质。

四：菜鸟求助：关于反相柱材的选择，有人用过ODS的么

就用ODS 50微米的反相硅胶就可以，需要跑加压柱，否则流速太慢，

且分离效果差，高压等于高效嘛。

估计你样品里含有酚羟基较多，所以会有大量样品吸附在正相硅胶上，

最好先过一遍正相在上反相，可以试试加入甲酸或乙酸，我加甲酸一般不会超过0.5%。正相硅胶最好别用含水试剂，否则就变成分配柱层析了，上样量减小。