微生物纯培养技术

一：微生物获得纯培养的方法理论依据是什么

微生物纯培养的方法

一、固体培养基分离

1、稀释倒平板

特点：菌落分离较为均匀，进行微生物计数结果相对准确。但操作相对麻烦，热敏感菌有时易被烫死，而严格好氧菌也可能因被固定在培养基中生长受到影响。

2、涂布平板法

特点：操作相对简单，是较常使用的常规方法。但有时会因涂布不均匀使某些部位的菌落不能分开，进行微生物计数时需对稀释和涂布过程的操作特别注意，否则不易得到准确的结果。

3、平板划线法

特点：操作简单，多用于对已有纯培养的确认和再次分离。

应用：这三种方法可用于所有能在固体培养基表面形成菌落的微生物的纯培养分离。并且，通过选用适当的选择平板及培养条件，可直接分离各种具有特定生理特征的微生物。和厌氧罐或厌氧手套箱技术结合，这3种方法也可用于获得各种厌氧菌的纯培养。

4、稀释摇管法

特点：稀释倒平板法的一种变通形式，但由于菌落形成在琼脂柱的中间，观察和挑取都相对困难。

应用：在缺乏专业的厌氧操作设备的情况下对严格厌氧菌进行分离和观察。

二、液体培养基分离

1、稀释法

特点：工作量大，是否获得纯培养需依靠统计学的推测。

应用：不能或不易在固体培养基上生长的微生物进行纯培养分离或数量统计。

2、富集培养

特点：一般不能直接获得微生物的纯培养，在通过富集培养使原本在自然环境中占少数的微生物的数量大大提高后，需再通过平板法进行相应微生物纯培养的分离和检测。 应用：

（1）根据某种微生物的特殊生长要求，按照意愿从自然界中对这种微生物进行有针对性的有效分离；

（2）分离培养出由科学家设计的特定环境中能生长的微生物，尽管我们并不知道什么微生物能在这种特定的环境中生长。

三、显微操作

单细胞（孢子）挑取

特点：分离过程直观，可靠，但对仪器和操作技术要求较高，多限于高度专业化的科学研究。而挑取的微生物单细胞或孢子需经固体或液体培养基培养后才能获得其纯培养物。 应用：从样品中直接分离所需的微生物细胞或孢子，获得其纯培养。

二：为什么硕说柯赫等建立的微生物纯培养技术是微生物学建立与发展的基石

因为如果培养微生物的时候不能够使用纯培养物来进行实验的话，实验结果几乎就是不可重复的，那结果也就毫无意义了。只有利用纯培养物获得的实验结果才具有可重复性，这样微生物学才能够不断的在前人的研究基础上向更深的方向去研究，才会有发展

三：为什么微生物学研究通常需要使用纯培养物？

要对其中的某种微生物进行研究.就必需获得其纯培养物.以排除其他微生物的干扰．

在微生物学中，在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体称为培养物(culture)，而只有一种微生物的培养物称为纯培养物(pure culture)。由于在通常情况下纯培养物能较好地被研究、利用和重复结果，因此把特定的微生物从自然界混杂存在的状态中分离、纯化出来的纯培养技术是进行微生物学研究的基础。

四：获得微生物的纯培养有几种常用的方法

一般是培养基，培养基分固态液态，人造的天然的。微生物生长繁殖能力很强的，稍微有点环境就可以，更何况是实验室人为控制环境

五：什么是微生物免培养技术

其通自选育工选育两类单独使用交叉进行 DNA Shuffling技术 编辑 随着PCR技术发展应用1994美stemmer提全新工进化技术——DNA Shuffling（称洗牌技术）该技术能模拟物数百间发进化程并短实验循环定向筛选特定基编码酶蛋白性提高几百倍甚至万倍功能性突变基其基本原理源同功能相同组同源基用DNA核酸酶I进行消化 产随机片段由些片段组文库使互引物模板进行PCR扩增基拷贝片段作另基拷贝引物引起模板转换重组发导入体内选择突变体作新轮体外重组般通2-3循环课获产物幅度提高重组突变体 2自选育 编辑 自界微物未经工诱变或杂交处理情况进行离纯化（见微物离纯化）进行纯培养测定（见微物测定）择优选取微物菌种种简单易行获优良菌种几率般难满足产需要 3工选育 编辑 诱变育种杂交育种两种 诱变育种 诱发基突变手段微物育种技术1927H.J. 马勒发现X射线增加突变率效；1944C.奥尔巴克首发现氮芥气诱变效应；随陆续发现许物理（紫外线、γ射线、快等）化诱变素化诱变素3种：①诱变剂与或核酸碱基发化变化使DNA复制碱基置换引起变异羟胺亚硝酸、硫酸二乙酯、甲基磺酸乙酯、硝基胍、亚硝基甲基脲等；②诱变剂碱基结构类似物复制参入DNA引起变异5-溴尿嘧啶、5-氨基尿嘧啶、8-氮鸟嘌呤2-氨基嘌呤等；③诱变剂DNA减少或增加1～2碱基使碱基突变点全部遗传密码转录翻译发错误导致码组移突变体现吖啶类物质些氮芥衍物（ICR）等诱变育种操作简便突变率高突变谱广仅能提高产量改进质量扩产品品种简化工艺条件1943自界离青霉素产菌效价20单位/毫升经系列诱变育种效价已达40000单位/毫升；金霉素产菌经诱变发酵液积累甲基金霉素；谷氨酸棒杆菌1299经紫外线诱变能产赖氨酸能产缬氨酸增加产品种类；土霉素产菌经诱变选能减少泡沫突变菌株提高发酵罐利用率诱变育种足缺乏定向性 杂交育种 同基型品系或种属间通交配或体细胞融合等手段形杂种或者通转化转导形重组体再些杂种或重组体或代筛选优良菌种通种离具新基组合重组体选由于具杂种优势旺盛、物量、适应性强及某些酶性提高新品系杂交育种式实验菌株殖式同异性杂交、准性重组、原质体融合、转化、转导、杂种质粒转化等；选择亲株、离群体代培养、择优劣杂种遗传析程基本相同杂交般指交配反应菌株进行交配或接合形杂种种适用范围广酒类、面包、药用饲料酵母育种链霉菌青霉菌抗素产量提高曲霉酶性增强等面均已获功 体细胞融合具性反应品系或种属间细胞融合染色体重组先用酶溶解细胞壁再用氯化钙-聚乙二醇处理原质体促使融合获杂种工业微物菌种改良积极作用 转化转导首先应用于细菌现已广泛用于链霉菌酵母菌等随着重组DNA技术发展重组质粒构建转化系统确立已目基转移受体细胞内能产具重要经济价值物性物质（疫苗、酶等）株系 微物与酿造工业、食品工业、物制品工业等关系非密切其菌株优良与否直接关系种工业产品坏甚至影响质量所培育优质、高产微物菌株十必要微物育种目要物合代谢途径朝所希望向加引导或者促使细胞内发基重新组合优化遗传性状使某些代谢产物量积累获所需要高产、优质低耗菌种作途径诱变育种直广泛应用目前内微物育种界主要采用仍规物理及化等诱变外原质体诱变技术已广泛应用于酶制剂、抗素、氨基酸、维素等菌种选育并且取许重应用意义 4诱变育种 编辑 1.1物理诱变 1.1.1紫外照射 紫外线照射用物理诱变诱发微物突变种非用工具DNA RNA 嘌呤嘧啶吸收峰260nm260nm 紫外辐射效致死剂紫外辐射作用已种解释比较确定作用使DNA 形嘧啶二聚体[1]二聚体形阻碍碱基间配所能导致突变......余下全文>>